论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 研究综述 | 第12-24页 |
| 1 秀丽隐杆线虫生物学特征 | 第12页 |
| 2 线虫逃避行为概述 | 第12-23页 |
| 2.1 线虫对盐离子的逃避行为 | 第13-15页 |
| 2.2 线虫对温度的逃避行为 | 第15-16页 |
| 2.3 线虫对气味的逃避行为 | 第16-18页 |
| 2.4 线虫对病原菌的逃避行为 | 第18-22页 |
| 2.4.1 依赖于学习的病原逃避行为 | 第18-20页 |
| 2.4.2 非依赖学习的病原逃避行为 | 第20-22页 |
| 2.5 胰岛素/PI3-激酶信号通路在逃避行为调控中的作用 | 第22页 |
| 2.6 一元胺和多肽在逃避行为调控中的作用 | 第22-23页 |
| 3 本研究的意义 | 第23-24页 |
| 第二章 P38途径参与线虫逃避行为的调控 | 第24-46页 |
| 1 前言 | 第24页 |
| 2 实验材料与仪器 | 第24-34页 |
| 2.1 实验材料(仪器、试剂、培养基) | 第24-27页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第25页 |
| 2.1.3 主要试剂盒 | 第25页 |
| 2.1.4 主要培养基及配制方法 | 第25-26页 |
| 2.1.5 常用溶液的配制 | 第26-27页 |
| 2.2 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.2.1 实验所用到的线虫 | 第27页 |
| 2.2.2 实验菌株 | 第27页 |
| 2.2.3 CCWE或K-CGN化合物的获得 | 第27页 |
| 2.2.4 实验引物 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-34页 |
| 2.3.1 固体培养基培养线虫 | 第28-29页 |
| 2.3.2 线虫同步化 | 第29页 |
| 2.3.3 线虫的冻存 | 第29-30页 |
| 2.3.4 线虫对PA14细菌训练实验 | 第30页 |
| 2.3.5 线虫的逃避行为实验 | 第30-31页 |
| 2.3.6 线虫CCWE和K-CGN处理方法 | 第31页 |
| 2.3.7 线虫的趋化实验和统计tuning rate方法 | 第31页 |
| 2.3.8 线虫杂交实验 | 第31-33页 |
| 2.3.9 单线虫PCR方法 | 第33-34页 |
| 3 实验结果 | 第34-44页 |
| 3.1 P38途径参与调控秀丽隐杆线虫对PA14逃避行为 | 第34-40页 |
| 3.2 P38途径中的tir-1与nsy-1、sek-1和pmk-1调控逃避的作用不在同一通路上 | 第40-43页 |
| 3.3 P38途径不影响线虫对PA14的学习能力 | 第43页 |
| 3.4 pmk-1下游基因atf-7和skn-1不参与线虫对PA14逃避行为的调控 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 神经元表达PMK-1调控线虫对病原细菌PA14逃避行为 | 第46-64页 |
| 1 前言 | 第46页 |
| 2 材料和方法 | 第46-54页 |
| 2.1 实验材料 | 第46-47页 |
| 2.1.1 主要的仪器设备 | 第46-47页 |
| 2.1.2 实验所用到的线虫 | 第47页 |
| 2.1.3 实验菌株 | 第47页 |
| 2.3 实验方法 | 第47-54页 |
| 2.3.1 回复突变载体和过表达载体的构建 | 第47-51页 |
| 2.3.1.1 引物设计 | 第47-51页 |
| 2.3.2 显微注射(microinjection) | 第51-53页 |
| 2.3.3 线虫逃避实验 | 第53页 |
| 2.3.4 酵母转化overlap方法 | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-63页 |
| 3.1 PMK-1在神经元中定位,在PDF神经元中有表达 | 第54-58页 |
| 3.2 神经元表达PMK-1调控线虫逃避行为 | 第58-61页 |
| 3.3 PA14的气味以及物理致病性伤害的感知是pmk-1调控逃避行为必须的 | 第61-63页 |
| 4 讨论 | 第63-64页 |
| 第四章 血清素途径与神经肽受体NPR-1平行作用于PMK-1下游调控逃避 | 第64-96页 |
| 1 前言 | 第64页 |
| 2 材料和方法 | 第64-69页 |
| 2.1 实验材料 | 第64-65页 |
| 2.1.1 实验所用到的线虫 | 第64-65页 |
| 2.1.2 实验菌株 | 第65页 |
| 2.1.3 主要试剂盒 | 第65页 |
| 2.2 实验方法 | 第65-69页 |
| 2.2.1 线虫培养 | 第65页 |
| 2.2.2 细菌预暴露侵染 | 第65页 |
| 2.2.3 线虫RNAi干扰方法 | 第65-66页 |
| 2.2.4 Real-time PCR | 第66-69页 |
| 3 结果 | 第69-95页 |
| 3.1 血清素途径作用于PMK-1下游调控对PA14的逃避行为 | 第69-82页 |
| 3.2 神经肽受体NPR-1作用于pmk-1下游调控对PA14的逃避行为 | 第82-90页 |
| 3.3 PMK-1调控线虫对PA14逃避行为下游基因筛选 | 第90-91页 |
| 3.4 血清素途径与神经肽受体NPR-1平行作用于PMK-1下游调控逃避 | 第91-95页 |
| 4 讨论 | 第95-96页 |
| 第五章 NPR-1调控线虫对病原细菌逃避行为下游基因研究 | 第96-110页 |
| 1 前言 | 第96-97页 |
| 2 实验材料与仪器 | 第97-100页 |
| 2.1 实验材料(仪器、试剂、培养基) | 第97页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第97页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第97页 |
| 2.1.3 主要试剂盒 | 第97页 |
| 2.1.4 主要培养基及配制方法 | 第97页 |
| 2.1.5 常用溶液的配制 | 第97页 |
| 2.2 实验材料 | 第97-98页 |
| 2.2.1 实验所用到的线虫 | 第97页 |
| 2.2.2 实验菌株 | 第97-98页 |
| 2.3 实验方法 | 第98-100页 |
| 2.3.1 测序前线虫样品处理方法 | 第98页 |
| 2.3.2 测序和分析流程 | 第98-99页 |
| 2.3.3 对GO和KEGG富集得到的通路相关基因RNAi干扰后逃避行为检测 | 第99-100页 |
| 3 实验结果 | 第100-107页 |
| 3.1 N2线虫和NPR-1(ad609)线虫总RNA提取结果 | 第100-101页 |
| 3.2 差异基因GO富集分析 | 第101-102页 |
| 3.3 差异基因KEGG富集分析 | 第102-103页 |
| 3.4 主要富集通路相关基因筛选 | 第103-107页 |
| 4 讨论 | 第107-110页 |
| 全文总结与展望 | 第110-114页 |
| 附录 | 第114-138页 |
| 1 npr-1(ad609)较之N2下调基因功能列表 | 第114-118页 |
| 2 npr-1(ad609)较之N2上调基因功能列表 | 第118-132页 |
| 3 克隆载体pMD18-T Vector | 第132-133页 |
| 4 克隆载体pMD18-T simple Vector | 第133-134页 |
| 5 表达载体pPD95_79 | 第134-135页 |
| 6 表达载体pPD95.79 | 第135-136页 |
| 7 中英文对照 | 第136-138页 |
| 参考文献 | 第138-143页 |
| 科研成果 | 第143-144页 |
| 致谢 | 第144-145页 |
