论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 主要缩写词 | 第10-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-33页 |
| 1.1 根毛生长的四个阶段 | 第11-15页 |
| 1.1.1 根表皮细胞的特异性分化 | 第11-14页 |
| 1.1.2 根毛生长的起始 | 第14-15页 |
| 1.1.3 根毛的顶端生长 | 第15页 |
| 1.2 调控根毛顶端生长的分子机制 | 第15-26页 |
| 1.2.1 根毛细胞的细胞壁对根毛顶端生长的影响 | 第15-16页 |
| 1.2.2 细胞骨架与根毛顶端生长 | 第16-21页 |
| 1.2.3 Ca~(2+)与根毛顶端生长 | 第21页 |
| 1.2.4 ROP GTPase对根毛生长的影响 | 第21-25页 |
| 1.2.5 根毛细胞中的囊泡运输过程 | 第25-26页 |
| 1.3 SNARE蛋白的研究进展 | 第26-32页 |
| 1.3.1 SNARE蛋白的结构特点与功能 | 第26-28页 |
| 1.3.2 植物中SNARE蛋白的研究进展 | 第28-31页 |
| 1.3.3 SNARE蛋白SYP121的研究 | 第31-32页 |
| 1.4 本论文研究目的和意义 | 第32-33页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第33-53页 |
| 2.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第33页 |
| 2.1.2 菌株及质粒 | 第33页 |
| 2.1.3 常用药品及试剂 | 第33-34页 |
| 2.2 仪器设备 | 第34-35页 |
| 2.3 实验方法 | 第35-53页 |
| 2.3.1 常用培养基的配制 | 第35-36页 |
| 2.3.2 常用试剂及溶液的配制 | 第36-39页 |
| 2.3.3 拟南芥的种植 | 第39-40页 |
| 2.3.4 拟南芥植株杂交 | 第40页 |
| 2.3.5 拟南芥基因组DNA的提取 | 第40页 |
| 2.3.6 拟南芥总RNA提取及mRNA的反转录 | 第40-41页 |
| 2.3.7 半定量RT-PCR | 第41-42页 |
| 2.3.8 拟南芥T-DNA插入突变体纯合体的筛选与鉴定 | 第42页 |
| 2.3.9 质粒DNA的提取 | 第42-43页 |
| 2.3.10 琼脂糖凝胶回收DNA | 第43页 |
| 2.3.11 目的片段与载体的连接 | 第43-44页 |
| 2.3.12 大肠杆菌感受态的转化及阳性克隆的筛选 | 第44页 |
| 2.3.13 农杆菌感受态的转化 | 第44页 |
| 2.3.14 农杆菌浸花转化 | 第44页 |
| 2.3.15 转基因植株的筛选 | 第44-45页 |
| 2.3.16 GUS活性染色 | 第45页 |
| 2.3.17 根毛生长动态的实时观察与数据分析 | 第45页 |
| 2.3.18 重组蛋白的原核表达和纯化 | 第45-47页 |
| 2.3.19 VAMP722抗体的制备及特异性检测 | 第47页 |
| 2.3.20 拟南芥植株总蛋白的提取 | 第47-48页 |
| 2.3.21 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第48页 |
| 2.3.22 蛋白质免疫印迹实验(western blot) | 第48-49页 |
| 2.3.23 基于PCR的定点突变 | 第49-50页 |
| 2.3.24 双分子荧光互补实验(BiFC) | 第50-51页 |
| 2.3.25 拟南芥原生质体瞬时表达系统 | 第51-52页 |
| 2.3.26 激光共聚焦显微镜观察 | 第52页 |
| 2.3.27 荧光漂白恢复实验(FRAP) | 第52-53页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第53-90页 |
| 3.1 SYP121参与调控根毛的顶端生长 | 第53-58页 |
| 3.1.1 syp121突变体的鉴定及过量表达转基因植株的获得 | 第53-54页 |
| 3.1.2 syp121突变体根毛生长异常 | 第51-55页 |
| 3.1.3 syp121突变体的回补分析实验 | 第55-57页 |
| 3.1.4 syp121-2突变体根毛生长速率变慢 | 第57-58页 |
| 3.2 SYP121在拟南芥中的组织定位分析 | 第58-59页 |
| 3.2.1 SYP121组织定位的生物信息数据 | 第58页 |
| 3.2.2 拟南芥组织器官中SYP121表达模式的分析 | 第58-59页 |
| 3.3 SYP121的亚细胞定位分析 | 第59-64页 |
| 3.3.1 SYP121定位于根毛细胞顶端 | 第59-61页 |
| 3.3.2 SYP121在快速生长根毛顶端的定位存在振荡 | 第61-62页 |
| 3.3.3 过量表达SYP121的胞内域不能恢复syp121-1根毛异常的表型 | 第62-64页 |
| 3.4 SYP121与ROP2之间的联系 | 第64-76页 |
| 3.4.1 SYP121与ROP2可能共同调控根毛的生长 | 第64-65页 |
| 3.4.2 过量表达SYP121能部分恢复rop2-1的表型 | 第65-67页 |
| 3.4.3 SYP121可以与ROP2在根毛顶端质膜共定位 | 第67-70页 |
| 3.4.4 SYP121优先与活性状态的ROP2结合 | 第70-76页 |
| 3.5 ROP2调控SYP121在根毛细胞中的定位 | 第76-79页 |
| 3.6 活性状态的ROP2可以与SYP121的N端及H结构域结合 | 第79-82页 |
| 3.6.1 体外pull-down实验证明His-CA-ROP2可以与SYP121的N端和H结构域结合 | 第79-81页 |
| 3.6.2 BiFC实验证明活性状态的ROP2在体内可以与SYP121的N端和H结构域结合 | 第81-82页 |
| 3.7 活性状态的ROP2促进体内SYP121形成SNARE复合体 | 第82-90页 |
| 3.7.1 v-SNARE蛋白VAMP722抗血清的制备与检测 | 第82-85页 |
| 3.7.2 活性状态的ROP2在体内促进SYP121与VAMP722的结合 | 第85-86页 |
| 3.7.3 ROP2缺失影响体内SYP121与VAMP722的结合 | 第86-88页 |
| 3.7.4 活性状态的ROP2可以促进SYP121介导的囊泡融合 | 第88-90页 |
| 第四章 讨论 | 第90-95页 |
| 4.1 SYP121参与调控拟南芥根毛细胞生长 | 第90-92页 |
| 4.2 SYP121在ROP2信号途径中参与对根毛顶端生长的调控 | 第92页 |
| 4.3 活性状态的ROP2与SEC11之间的关系 | 第92-93页 |
| 4.4 ROP2与SYP121对根毛细胞中囊泡运输的影响 | 第93-95页 |
| 第五章 结论 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-112页 |
| 附录: 微管正端结合蛋白AUG8参与调控拟南芥的气孔运动 | 第112-120页 |
| 致谢 | 第120-122页 |
| 作者简历 | 第122页 |
