论文目录 | |
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-35页 |
| 1.1 UHRF1在表观遗传调控和肿瘤发生中的研究进展 | 第14-22页 |
| 1.1.1 表观遗传学简介 | 第14-15页 |
| 1.1.2 DNA甲基化 | 第15页 |
| 1.1.3 UHRF1背景介绍 | 第15-17页 |
| 1.1.4 UHRF1的生物学功能 | 第17-21页 |
| 1.1.5 UHRF1与肿瘤靶向治疗 | 第21-22页 |
| 1.2 肿瘤细胞糖代谢与AMPK信号通路研究进展 | 第22-35页 |
| 1.2.1 肿瘤代谢简介 | 第22-24页 |
| 1.2.2 癌基因、抑癌基因与糖代谢调控 | 第24-28页 |
| 1.2.3 能量感受器AMPK与代谢调控 | 第28-35页 |
| 第二章 材料与方法 | 第35-56页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-41页 |
| 2.1.1 质粒 | 第35页 |
| 2.1.2 菌株和细胞系 | 第35页 |
| 2.1.3 化学试剂 | 第35-36页 |
| 2.1.4 抗体信息 | 第36-37页 |
| 2.1.5 siRNA序列 | 第37页 |
| 2.1.6 shRNA序列 | 第37-38页 |
| 2.1.7 引物序列 | 第38-41页 |
| 2.2 实验方法 | 第41-56页 |
| 2.2.1 表达质粒的构建 | 第41-45页 |
| 2.2.2 pLKO.1-shRNA质粒构建 | 第45-47页 |
| 2.2.3 细胞培养与转染 | 第47-48页 |
| 2.2.4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳与蛋白质印迹 | 第48-50页 |
| 2.2.5 蛋白半衰期检测实验 | 第50页 |
| 2.2.6 细胞中RNA抽提、反转以及实时荧光定量PCR | 第50-52页 |
| 2.2.7 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP) | 第52-53页 |
| 2.2.8 免疫荧光染色(Immunofluorescence Staining) | 第53-54页 |
| 2.2.9 慢病毒包装及基因过表达或敲低细胞稳系的构建 | 第54页 |
| 2.2.10 体内泛素化实验 | 第54-55页 |
| 2.2.11 小分子化合物筛选 | 第55页 |
| 2.2.12 细胞计数 | 第55-56页 |
| 第三章 HSP90抑制剂诱导UHRF1蛋白降解的作用机制及功能研究 | 第56-74页 |
| 3.1 引言 | 第56-57页 |
| 3.2 实验结果 | 第57-71页 |
| 3.2.1 HSP90抑制剂17-AAG诱导UHRF1蛋白水平的下调 | 第57-59页 |
| 3.2.2 HSP90抑制剂诱导UHRF1蛋白通过泛素-蛋白酶体途径降解 | 第59-61页 |
| 3.2.3 HSP90抑制剂诱导UHRF1的降解依赖于HSP70 | 第61-63页 |
| 3.2.4 HSP90抑制剂诱导UHRF1的降解不依赖于E3泛素连接酶CHIP和CUL5 | 第63-65页 |
| 3.2.5 UHRF1自身的E3泛素连接酶活性不参与HSP90抑制剂对UHRF1的降解 | 第65页 |
| 3.2.6 SCF~(β-TRCP) E3泛素连接酶复合体并不参与HSP90抑制剂介导的UHRF1蛋白降解过程 | 第65-68页 |
| 3.2.7 HSP90抑制剂对肿瘤细胞增殖的影响可能部分依赖于诱导UHRF1蛋白的降解 | 第68-71页 |
| 3.3 讨论 | 第71-73页 |
| 3.4 主要结论与研究意义 | 第73-74页 |
| 第四章 UHRF1在肿瘤细胞代谢调控中的作用及机制研究 | 第74-92页 |
| 4.1 引言 | 第74-76页 |
| 4.2 实验结果 | 第71-86页 |
| 4.2.1 肿瘤细胞中敲低UHRF1抑制了糖酵解代谢途径相关重要基因的表达 | 第76-78页 |
| 4.2.2 UHRF1调控AMPK激酶的活性 | 第78-80页 |
| 4.2.3 UHRF1调控AMPK激酶活性不依赖于DNA甲基化途径 | 第80-81页 |
| 4.2.4 细胞中敲除UHRF2不影响AMPK的酶活 | 第81-82页 |
| 4.2.5 UHRF1与AMPK互作抑制了LKB1与AMPKα2的结合 | 第82-84页 |
| 4.2.6 UHRF1调控AMPK激酶活性依赖于CaMKKβ的酶活 | 第84-86页 |
| 4.3 讨论 | 第86-92页 |
| 4.3.1 UHRF1调控肿瘤细胞糖代谢途径 | 第87页 |
| 4.3.2 UHRF1抑制了AMPK激酶的活性且不依赖于DNA甲基化的变化 | 第87-89页 |
| 4.3.3 UHRF1与AMPK互作抑制了LKB1与AMPKα2的结合 | 第89-90页 |
| 4.3.4 UHRF1调控AMPK的活性依赖于CaMKKβ的酶活 | 第90-91页 |
| 4.3.5 小结与展望 | 第91-92页 |
| 附录 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-125页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文与获得的奖励 | 第125-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
