论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-8
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| 英文摘要 | 第8-10
页 |
| 缩写词表 | 第10-11
页 |
| 第一部分 前言 | 第11-29
页 |
| 1 植物抗虫基因工程的研究进展 | 第11-14
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| 1．1 Bt毒蛋白基因 | 第11-12
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| 1．2 蛋白酶抑制剂基因 | 第12-13
页 |
| 1．3 淀粉酶抑制剂基因 | 第13-14
页 |
| 2 植物凝集素 | 第14-17
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| 2．1 定义 | 第14
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| 2．2 分类 | 第14
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| 2．3 分布 | 第14-15
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| 2．4 作用方式 | 第15
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| 2．5 防御功能 | 第15-16
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| 2．6 几种重要的凝集素 | 第16-17
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| 3 植物基因分离与克隆的研究进展 | 第17-23
页 |
| 3．1 PCR扩增克隆 | 第17-18
页 |
| 3．2 功能克隆 | 第18
页 |
| 3．3 定位克隆 | 第18-19
页 |
| 3．4 转座子标签法 | 第19
页 |
| 3．5 人工合成并克隆基因 | 第19
页 |
| 3．6 表型克隆 | 第19-20
页 |
| 3．7 mRNA差异显示克隆 | 第20
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| 3．8 减法杂交技术 | 第20
页 |
| 3．9 RACE的方法 | 第20-23
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| 4 外源基因导入植物的方法 | 第23-25
页 |
| 4．1 花粉管通道法 | 第23
页 |
| 4．2 聚乙二醇介导的转化法 | 第23
页 |
| 4．3 电击法 | 第23-24
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| 4．4 基因枪法 | 第24
页 |
| 4．5 农杆菌介导的转化法 | 第24-25
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| 5 中国现有的石蒜科植物以及基因克隆 | 第25-27
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| 6 本研究的目的 | 第27-29
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| 第二部分 材料与方法 | 第29-44
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| 1 实验材料 | 第29-31
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| 1．1 供试品种 | 第29
页 |
| 1．2 质粒及菌种 | 第29
页 |
| 1．3 抗生素及其工作浓度 | 第29
页 |
| 1．4 试剂 | 第29
页 |
| 1．5 培养基 | 第29-30
页 |
| 1．6 常用试剂 | 第30-31
页 |
| 2 实验方法 | 第31-44
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| 2．1 用TRIzol法提取植物总RNA操作步骤 | 第31
页 |
| 2．2 检测RNA的质量与纯度 | 第31-32
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| 2．3 葱莲凝集素基因克隆操作步骤 | 第32-35
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| 2．3．1 第一链cDNA的合成 | 第32
页 |
| 2．3．2 3’RACE的方法 | 第32
页 |
| 2．3．3 5’RACE之前用GlassMAX纯化cDNA第一链 | 第32-33
页 |
| 2．3．4 cDNA第一链的poly（dC）加尾 | 第33
页 |
| 2．3．5 5’RACE第一轮PCR | 第33
页 |
| 2．3．6 第二轮PCR | 第33
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| 2．3．7 全长RT-PCR | 第33-34
页 |
| 2．3．8 加接头的编码区cDNA的PCR | 第34
页 |
| 2．3．9 柱回收琼脂糖凝胶电泳的目的片段 | 第34-35
页 |
| 2．3．10 用于pGEM T-easy载体连接的pfu扩增产物加dATP方法 | 第35
页 |
| 2．3．11 将回收的目的片段克隆到pGEM-Teasy Vector上 | 第35
页 |
| 2．4 载体构建中的有关方法 | 第35-38
页 |
| 2．4．1 大肠杆菌质粒的少量提取与鉴定（碱法） | 第35-36
页 |
| 2．4．2 大肠杆菌质粒的大量提取 | 第36
页 |
| 2．4．3 质粒和目的片段的酶切 | 第36-37
页 |
| 2．4．4 载体的去磷 | 第37
页 |
| 2．4．5 连接反应 | 第37
页 |
| 2．4．6 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第37
页 |
| 2．4．7 大肠杆菌的转化 | 第37-38
页 |
| 2．5 植物转化的相关方法 | 第38-40
页 |
| 2．5．1 农杆菌EHA105感受态的制备 | 第38
页 |
| 2．5．2 农杆菌的转化 | 第38
页 |
| 2．5．3 农杆菌质粒DNA的提取 | 第38-39
页 |
| 2．5．4 利用叶盘法转化烟草 | 第39
页 |
| 2．5．5 水稻愈伤组织的获得与转化 | 第39-40
页 |
| 2．6 转基因植物的分子检测 | 第40-44
页 |
| 2．6．1 植物基因组DNA的微量提取 | 第40-41
页 |
| 2．6．2 PCR检测葱莲凝集素基因 | 第41
页 |
| 2．6．3 PCR检测gus基因 | 第41
页 |
| 2．6．4 western blot检测zca在烟草中的表达 | 第41-44
页 |
| 第三部分 结果与讨论 | 第44-61
页 |
| 1 RNA的提取质量及影响因素 | 第44-45
页 |
| 1．1 RNA的提取质量 | 第44
页 |
| 1．2 影响RNA质量的因素 | 第44-45
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| 2 RACE结果及其影响因素 | 第45-49
页 |
| 2．1 3’RACE结果 | 第45
页 |
| 2．2 5’RACE的结果 | 第45-46
页 |
| 2．3 cDNA全长及编码区的的获得 | 第46-48
页 |
| 2．4 影响RACE的因素 | 第48-49
页 |
| 3 zca的序列分析 | 第49-55
页 |
| 3．1 开放阅读框 | 第49-50
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| 3．2 ZCA蛋白的结构和功能研究 | 第50-51
页 |
| 3．3 zca同源性分析 | 第51-55
页 |
| 3．3．1 zca与gna的同源性分析 | 第51-53
页 |
| 3．3．2 与同属的韭莲凝集素基因（zga）的同源性分析 | 第53-55
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| 4 含zca基因的植物双元表达载体p2301-zca和p1305-zca的构建 | 第55-59
页 |
| 5 转化烟草的结果及分析 | 第59-60
页 |
| 6 转化水稻的结果及分析 | 第60-61
页 |
| 小结 | 第61-62
页 |
| 参考文献 | 第62-68
页 |
| 附录 | 第68-79页 |
