论文目录 | |
| 摘要 | 第1-8
页 |
| 前言 | 第8-13
页 |
| 1 番茄 ToTOM3 基因的克隆和序列分析 | 第13-36
页 |
| · 材料与方法 | 第14-23
页 |
| · 材料 | 第14
页 |
| · 植物材料 | 第14
页 |
| · 菌株与质粒 | 第14
页 |
| · 酶、试剂盒和化学试剂 | 第14
页 |
| · 培养基和常用溶液的配制 | 第14
页 |
| · 常规分子生物学操作方法 | 第14-23
页 |
| · 番茄总RNA 的提取纯化 | 第14-15
页 |
| · 番茄总DNA 的提取 | 第15-16
页 |
| · 3′RACE | 第16
页 |
| · 5′RACE | 第16-17
页 |
| · PCR 反应 | 第17
页 |
| · PCR 产物的克隆 | 第17
页 |
| · DNA 片段的纯化 | 第17-18
页 |
| · 载体的脱磷酸化处理 | 第18
页 |
| · 突出DNA 片段末端的补平 | 第18
页 |
| · DNA 限制性内切酶反应 | 第18-19
页 |
| · DNA连接反应 | 第19
页 |
| · DNA的转化 | 第19-20
页 |
| · 质粒的提取 | 第20-21
页 |
| · Southern 杂交 | 第21-22
页 |
| · 菌落原位杂交 | 第22
页 |
| · 相对定量RT-PCR | 第22-23
页 |
| · 结果与分析 | 第23-34
页 |
| · ToTOM3基因全长cDNA的克隆 | 第23-27
页 |
| · ToTOM3 基因3′端序列的克隆 | 第23-24
页 |
| · ToTOM3 基因5′端序列的克隆 | 第24-25
页 |
| · ToTOM3 基因全长cDNA 的序列 | 第25-27
页 |
| · ToTOM3 基因编码蛋白质的氨基酸序列分析 | 第27-30
页 |
| · ToTOM3 基因编码蛋白质的疏水区域和跨膜结构区域 | 第27-28
页 |
| · ToTOM3 基因的同源性分析 | 第28-30
页 |
| · ToTOM3 全长基因的克隆 | 第30-33
页 |
| · ToTOM3 全长基因5′端片段的获得 | 第30-32
页 |
| · ToTOM3 全长基因3′端片段的获得 | 第32-33
页 |
| · ToTOM3 基因的结构 | 第33-34
页 |
| · ToTOM3 基因的内含子和外显子 | 第33
页 |
| · ToTOM3 基因的启动子序列 | 第33-34
页 |
| · ToTOM3 基因的时空表达 | 第34
页 |
| · 小结 | 第34-36
页 |
| 2 ToTOM3 基因的功能鉴定 | 第36-66
页 |
| · 材料与方法 | 第38-43
页 |
| · 材料 | 第38
页 |
| · 常规分子生物学操作方法 | 第38
页 |
| · 番茄的遗传转化 | 第38-40
页 |
| · 三亲结合法向农杆菌导入目的质粒 | 第38-39
页 |
| · 无菌苗的获得 | 第39
页 |
| · Flamingo-Bill外植体的转化 | 第39-40
页 |
| · 转基因植株的扩繁 | 第40
页 |
| · 盆栽 | 第40
页 |
| · 转基因番茄的分子生物学检测 | 第40-42
页 |
| · PCR 检测 | 第40-41
页 |
| · Southern 杂交检测 | 第41-42
页 |
| · 转基因番茄的抗病鉴定 | 第42-43
页 |
| · 磨檫接种法 | 第42
页 |
| · 病毒相对含量的测定 | 第42-43
页 |
| · 结果与分析 | 第43-64
页 |
| · 反义RNA 表达质粒的构建 | 第43-46
页 |
| · 反义RNA 表达质粒的构建策略 | 第43-44
页 |
| · 番茄 ToTOM3 全长转录区的 PCR 克隆 | 第44-45
页 |
| · ToTOM3 基因反义 RNA 表达质粒 | 第45-46
页 |
| · RNAi表达质粒的构建 | 第46-51
页 |
| · RNAi 表达质粒pBIToT3R-A 的构建 | 第47-49
页 |
| · RNAi 表达质粒pBIToT3R-B 的构建 | 第49-51
页 |
| · 将表达质粒导入农杆菌 EHA105 | 第51
页 |
| · 转 ToTOM3 基因反义 RNA 和 RNAi 表达质粒的转基因番茄 | 第51-55
页 |
| · 转基因番茄的分子生物学检测 | 第55-58
页 |
| · 转基因番茄的 PCR 检测 | 第55-56
页 |
| · 转基因番茄的 Southern 杂交分析 | 第56-58
页 |
| · 转基因番茄对 TMV 和 CMV 的抗性 | 第58-64
页 |
| · 症状表现 | 第58-60
页 |
| · 转基因番茄内TMV 的相对含量 | 第60-62
页 |
| · 转基因番茄内CMV的相对含量 | 第62-64
页 |
| · 转基因番茄中ToTOM3基因转录水平与抗病性之间的关系 | 第64
页 |
| · 小结 | 第64-66
页 |
| · 讨论 | 第66-71
页 |
| · ToTOM3 基因 | 第66
页 |
| · 保守的TOM 基因家族 | 第66-67
页 |
| · 寄主因子—抗病毒基因工程中全新的标靶基因 | 第67-69
页 |
| · 转基因番茄的抗病机制 | 第69
页 |
| · ToTOM3 在亚细胞结构上的定位 | 第69-71
页 |
| · ToTOM3 的在CMV 复制中的相对活性 | 第71
页 |
| · 结论 | 第71-72
页 |
| 致谢 | 第72-74
页 |
| 参考文献 | 第74-94
页 |
| 英文摘要 | 第94-96
页 |
| 附录 A 文献综述 正链 RNA 病毒与寄主植物的相互作用 | 第96-116
页 |
| 附录 B ToTOM3 基因全长序列及其启动子序列 | 第116-121
页 |
| 附录 C 常用培养基和溶液 | 第121-122
页 |
| 附录 D 缩略词和英汉对照 | 第122-123页 |
