论文目录 | |
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-38页 |
| 1.1 细菌中的第二信使(p)ppGpp | 第13-25页 |
| 1.1.1 细菌的核苷类第二信使 | 第13-14页 |
| 1.1.2 细菌中(p)ppGpp的合成与水解 | 第14-16页 |
| 1.1.3 (p)ppGpp对DNA复制的调控 | 第16页 |
| 1.1.4 (p)ppGpp对基因转录的调控 | 第16-20页 |
| 1.1.5 (p)ppGpp对蛋白质翻译的调控 | 第20-21页 |
| 1.1.6 (p)ppGpp与σ因子RpoS的关系 | 第21-23页 |
| 1.1.7 (p)ppGpp对细菌生理的影响 | 第23-24页 |
| 1.1.8 (p)ppGpp与生物被膜调控 | 第24-25页 |
| 1.2 恶臭假单胞菌KT2440生物被膜的组成及调控 | 第25-37页 |
| 1.2.1 恶臭假单胞菌KT2440的介绍 | 第25-26页 |
| 1.2.2 恶臭假单胞菌的胞外多糖 | 第26-28页 |
| 1.2.3 恶臭假单胞菌的胞外粘附蛋白 | 第28-30页 |
| 1.2.4 生物被膜的形成 | 第30-32页 |
| 1.2.5 生物被膜的消散 | 第32-34页 |
| 1.2.6 生物被膜与细菌的生存 | 第34-35页 |
| 1.2.7 生物被膜中的细菌群体关系 | 第35-37页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第37-38页 |
| 2 材料和方法 | 第38-55页 |
| 2.1 材料 | 第38-42页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第38-39页 |
| 2.1.2 主要试剂和药品 | 第39-40页 |
| 2.1.3 培养基及常用溶液的配制 | 第40-42页 |
| 2.2 方法 | 第42-55页 |
| 2.2.1 菌株培养 | 第42页 |
| 2.2.2 工具载体的构建 | 第42-43页 |
| 2.2.3 大肠杆菌热激感受态细胞的制备及热激转化 | 第43-44页 |
| 2.2.4 两亲本杂交 | 第44页 |
| 2.2.5 电激转化感受态细胞的制备及电激转化 | 第44-45页 |
| 2.2.6 基因缺失突变体的构建 | 第45-47页 |
| 2.2.7 生物被膜的培养与检测 | 第47页 |
| 2.2.8 刚果红吸附能力的检测 | 第47-48页 |
| 2.2.9 总多糖的提取与定量 | 第48-49页 |
| 2.2.10 总RNA的提取 | 第49页 |
| 2.2.11 qRT-PCR检测基因表达水平 | 第49-50页 |
| 2.2.12 基因转录起始位点的鉴定 | 第50页 |
| 2.2.13 β-半乳糖苷酶活性的测定 | 第50-51页 |
| 2.2.14 定点突变DNA碱基序列 | 第51页 |
| 2.2.15 蛋白的诱导表达、纯化及浓度测定 | 第51-52页 |
| 2.2.16 凝胶迁移电泳实验 | 第52-53页 |
| 2.2.17 DNaseI足迹实验 | 第53-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-84页 |
| 3.1 恶臭假单胞菌KT2440中(p)ppGpp对生物被膜的调控作用 | 第55-67页 |
| 3.1.1 KT2440的relA和spoT互补大肠杆菌相关突变体 | 第55-56页 |
| 3.1.2 构建relA和relA-spoT突变体 | 第56-58页 |
| 3.1.3 (p)ppGpp对KT2440生物被膜形成能力的影响 | 第58-60页 |
| 3.1.4 (p)ppGpp对KT2440表面粘附的影响 | 第60页 |
| 3.1.5 (p)ppGpp相关突变体气液界面生物被膜的形态 | 第60-63页 |
| 3.1.6 (p)ppGpp对胞外多糖产量的影响 | 第63-64页 |
| 3.1.7 胞外多糖基因在(p)ppGpp相关突变体中的表达情况 | 第64-65页 |
| 3.1.8 粘附蛋白基因在(p)ppGpp相关突变体中的表达情况 | 第65-66页 |
| 3.1.9 (p)ppGpp对调控因子FleQ和RpoS表达的影响 | 第66-67页 |
| 3.2 胞外多糖合成基因簇pea的表达调控 | 第67-84页 |
| 3.2.1 构建rpoS、pea、lapF、pea-lapF、amrZ突变体 | 第67-68页 |
| 3.2.2 对pea基因簇启动子区的分析 | 第68-71页 |
| 3.2.3 RpoS调控pea转录 | 第71-74页 |
| 3.2.4 c-di-GMP介导的褶皱菌斑依赖Pea多糖 | 第74-76页 |
| 3.2.5 Pea多糖在生物被膜发育中的作用 | 第76-78页 |
| 3.2.6 预测pea启动子区域的AmrZ结合位点 | 第78-79页 |
| 3.2.7 AmrZ抑制pea的表达 | 第79-81页 |
| 3.2.8 AmrZ直接结合pea启动子 | 第81-84页 |
| 4 讨论与总结 | 第84-91页 |
| 4.1 讨论 | 第84-89页 |
| 4.1.1 (p)ppGpp对生物被膜的调控作用-讨论 | 第84-86页 |
| 4.1.2 (p)ppGpp与生物被膜的消散-讨论 | 第86-87页 |
| 4.1.3 胞外多糖合成基因pea的调控与功能-讨论 | 第87-89页 |
| 4.2 总结 | 第89-91页 |
| 5 展望 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-110页 |
| 附录A 本文所用引物 | 第110-113页 |
| 附录B 论文发表和待发表情况 | 第113-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
