论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| abstract | 第6-13页 |
| 缩略词表 | 第13-15页 |
| 绪论 | 第15-18页 |
| 第一部分 重组腺病毒载体Adv-HBcAg-TPPⅡ的构建及病毒包装、纯化和鉴定 | 第18-49页 |
| 1.前言 | 第18-19页 |
| 2.材料和方法 | 第19-32页 |
| 2.1 主要仪器和试剂 | 第19-20页 |
| 2.2 主要试剂配制 | 第20-25页 |
| 2.4 设计引物 | 第25页 |
| 2.5 pAdeno-MCMV-EGFP-P2A-HBcAg-3FLAG和p Adeno-MCMV-EGFP-P2A-HBcAg-TPPⅡ-3FLAG质粒的构建 | 第25-28页 |
| 2.6 重组腺病毒的包装和表达 | 第28-32页 |
| 2.7 统计学处理 | 第32页 |
| 3.结果 | 第32-46页 |
| 3.1 慢腺毒载体图谱 | 第32-34页 |
| 3.2 HBcAg-TPPⅡ和 HBcAg基因片段PCR扩增结果 | 第34-35页 |
| 3.3 重组克隆的菌落PCR鉴定 | 第35-36页 |
| 3.4 阳性克隆的测序结果 | 第36-44页 |
| 3.5 重组腺病毒滴度测定结果 | 第44页 |
| 3.6 重组腺病毒转染293T细胞转染率 | 第44页 |
| 3.7 重组腺病毒转染率 | 第44-45页 |
| 3.8 重组腺病毒目的蛋白的检测结果 | 第45-46页 |
| 4.讨论 | 第46-48页 |
| 5.小结 | 第48-49页 |
| 第二部分 Adv-HBcAg-TPPⅡ诱导特异性CTL反应的体外研究 | 第49-70页 |
| 1.前言 | 第49-50页 |
| 2.材料和方法 | 第50-59页 |
| 2.1 主要仪器和试剂 | 第50-52页 |
| 2.2 小鼠髓源性DC分离和培养 | 第52页 |
| 2.3 重组腺病毒转染DC | 第52-53页 |
| 2.4 DC表面分子检测 | 第53页 |
| 2.5 细胞因子IL-12P70 的检测 | 第53-54页 |
| 2.6 脾淋巴细胞的获取 | 第54页 |
| 2.7 T淋巴细胞的分离(尼龙毛柱法) | 第54-55页 |
| 2.8 T淋巴细胞分泌的细胞因子的检测 | 第55-56页 |
| 2.9 T细胞内因子检测 | 第56-57页 |
| 2.11 小鼠肥大细胞瘤细胞(P815/c)细胞株的培养 | 第57-58页 |
| 2.12 特异性CTL检测 | 第58-59页 |
| 2.13 统计学处理 | 第59页 |
| 3.结果 | 第59-68页 |
| 3.1 不同时期DC的形态 | 第59-61页 |
| 3.2 重组腺病毒转染DC细胞转染率 | 第61-62页 |
| 3.3 Adv-HBcAg-TPPⅡ DC细胞表面分子的表达 | 第62-63页 |
| 3.4 Adv-HBcAg-TPPⅡ促进DC分泌IL-12P | 第63-64页 |
| 3.5 Adv-HBcAg-TPPⅡ刺激Th1 型细胞因子的分泌 | 第64-67页 |
| 3.6 Adv-HBcAg-TPPⅡ促进T淋巴细胞增殖 | 第67页 |
| 3.7 Adv-HBcAg-TPPⅡ诱导CTL反应 | 第67-68页 |
| 4.讨论 | 第68-69页 |
| 5.小结 | 第69-70页 |
| 第三部分 Adv-HBcAg–TPPⅡ免疫HLA-A2 限制性C57BL/6 小鼠诱导特异性CTL反应的体内研究 | 第70-92页 |
| 1.前言 | 第70页 |
| 2.材料和方法 | 第70-81页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第70-72页 |
| 2.2 实验动物的处理 | 第72-73页 |
| 2.3 小鼠脾淋巴细胞的制备 | 第73页 |
| 2.4 T淋巴细胞的分离(尼龙毛柱法) | 第73-74页 |
| 2.5 T淋巴细胞分泌的细胞因子的检测 | 第74-75页 |
| 2.6 T细胞内因子检测 | 第75页 |
| 2.7 T淋巴细胞增殖活性检测 | 第75-76页 |
| 2.8 小鼠肥大瘤细胞P815 细胞株的培养 | 第76页 |
| 2.9 特异性CTL检测 | 第76-77页 |
| 2.10 RT-PCR法检测JAK/STAT信号通路的各指标表达水平 | 第77-78页 |
| 2.11 Western bloting法检测JAK/STAT信号通路 | 第78-81页 |
| 2.12 统计学处理 | 第81页 |
| 3.结果 | 第81-90页 |
| 3.1 重组腺病毒诱导小鼠T淋巴细胞分泌细胞因子 | 第81-84页 |
| 3.2 CD8α+IFN-γ+T和 CD4+IFN-γ+T淋巴细胞的检测 | 第84-86页 |
| 3.3 重组腺病毒Adv-HBcAg-TPPⅡ促进T淋巴细胞的增殖 | 第86-87页 |
| 3.4 重组腺病毒Adv-HBcAg-TPPⅡ增强特异性CTL反应 | 第87-88页 |
| 3.5 Adv-HBcAg-TPPⅡ对 JAK/STAT信号通路 | 第88-90页 |
| 4.讨论 | 第90-91页 |
| 5.小结 | 第91-92页 |
| 第四部分 Adv-HBcAg-TPPⅡ体内免疫HBV转基因小鼠诱导特异性CTL反应的研究 | 第92-127页 |
| 1.前言 | 第92页 |
| 2.材料和方法 | 第92-108页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第92-94页 |
| 2.2 实验动物饲养及处理 | 第94页 |
| 2.3 血清HBV DNA、HBsAg、以及AST和 ALT的检测 | 第94-95页 |
| 2.4 肝组织HE染色 | 第95-97页 |
| 2.5 肝组织HBcAg和 HBsAg免疫组化染色 | 第97-100页 |
| 2.6 小鼠脾淋巴细胞的制备 | 第100-101页 |
| 2.7 T淋巴细胞的分离(尼龙毛柱法) | 第101-102页 |
| 2.8 T淋巴细胞分泌的细胞因子的检测 | 第102-103页 |
| 2.9 T细胞内因子检测 | 第103页 |
| 2.10 T淋巴细胞增殖活性检测 | 第103页 |
| 2.11 小鼠肥大瘤细胞P815/c细胞株的培养 | 第103-104页 |
| 2.12 特异性CTL检测 | 第104-105页 |
| 2.13 RT-PCR法检测T-bet、GATA-3的m RNA表达水平 | 第105-106页 |
| 2.14 Western blotting检测 | 第106-108页 |
| 2.15 统计学处理 | 第108页 |
| 3.结果 | 第108-124页 |
| 3.1 血清HBV DNA、HBsAg、以及AST和 ALT的检测 | 第108-112页 |
| 3.2 肝组织HE染色 | 第112页 |
| 3.3 肝组织HBcAg和 HBsAg免疫组织化学分析 | 第112-114页 |
| 3.4 重组腺病毒免疫小鼠后诱导T淋巴细胞分泌细胞因子 | 第114-117页 |
| 3.5 CD8α+IFN-γ+T和 CD4+IFN-γ+T淋巴细胞的检测 | 第117-120页 |
| 3.6 T细胞增殖活性检测 | 第120页 |
| 3.7 特异性CTL反应 | 第120-121页 |
| 3.8 重组腺病毒对T-bet和 GATA-3 的影响 | 第121-124页 |
| 4.讨论 | 第124-126页 |
| 5.小结 | 第126-127页 |
| 结论 | 第127-128页 |
| 参考文献 | 第128-139页 |
| 致谢 | 第139-141页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第141-143页 |
