论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-15页 |
| Abstract | 第15-18页 |
| 符号说明 | 第19-21页 |
| 第一章 研究背景与文献综述 | 第21-44页 |
| 1 黑腹果蝇眼睛的发育 | 第21-24页 |
| 1.1 经典模式生物——黑腹果蝇 | 第21-22页 |
| 1.2 果蝇眼睛作为发育模式系统 | 第22页 |
| 1.3 果蝇眼睛发育过程的概述 | 第22-24页 |
| 2 眼睛决定基因网络(RDGN)和异位眼诱导 | 第24-31页 |
| 2.1 眼睛决定基因网络(RDGN) | 第24-26页 |
| 2.2 RDGN成员参与易位眼的诱导 | 第26-29页 |
| 2.3 易位眼诱导系统的应用 | 第29-30页 |
| 2.4 易位眼诱导系统的缺陷 | 第30-31页 |
| 3 Eyes absent(Eya)和Sine Oculis(So) | 第31-42页 |
| 3.1 Eyes absent的结构、功能以及和RDGN成员间的蛋白互作 | 第31-34页 |
| 3.2 Sine Oculis的结构、功能以及和RDGN成员间的蛋白互作 | 第34-36页 |
| 3.3 Eyes absent和Sine Oculis在果蝇发育过程中的作用 | 第36-37页 |
| 3.4 Eyes absent和Sine Oculia在果蝇眼睛发育过程中的作用 | 第37-38页 |
| 3.5 哺乳动物EYA1-4与发育和疾病的关系 | 第38-40页 |
| 3.6 哺乳动物SIX1-6与发育和疾病的关系 | 第40-42页 |
| 4 本论文的课题确立与研究内容 | 第42-44页 |
| 第二章 Eya酪氨酸磷酸酶活性对于果蝇发育和存活的影响 | 第44-67页 |
| 1 前言 | 第44-45页 |
| 2 实验材料与仪器设备 | 第45-48页 |
| 2.1 果蝇品系 | 第45-46页 |
| 2.2 细菌菌株及质粒 | 第46页 |
| 2.3 主要试剂 | 第46-48页 |
| 2.3.1 酶、抗生素和试剂盒 | 第46页 |
| 2.3.2 主要溶液 | 第46-47页 |
| 2.3.3 抗体 | 第47-48页 |
| 2.4 仪器设备 | 第48页 |
| 3 实验方法 | 第48-56页 |
| 3.1 质粒构建 | 第48-54页 |
| 3.1.1 胶回收PCR产物 | 第50-51页 |
| 3.1.2 双酶切系统 | 第51页 |
| 3.1.3 酶切产物纯化 | 第51页 |
| 3.1.4 T4 DNA连接体系 | 第51页 |
| 3.1.5 制备感受态细胞 | 第51-52页 |
| 3.1.6 转化 | 第52页 |
| 3.1.7 DNA质粒小量提取 | 第52-53页 |
| 3.1.8 DNA质粒大量提取 | 第53-54页 |
| 3.1.9 pCR-Blunt Ⅱ-TOPO PCR克隆 | 第54页 |
| 3.2 果蝇实验 | 第54-55页 |
| 3.2.1 果蝇饲养和杂交 | 第54页 |
| 3.2.2 显微注射及转基因果蝇的检测 | 第54页 |
| 3.2.3 存活力检测 | 第54-55页 |
| 3.2.4 生殖力检测 | 第55页 |
| 3.3 成虫眼睛内部结构的组化检测 | 第55页 |
| 3.4 幼虫眼成虫盘免疫组化染色 | 第55页 |
| 3.5 幼虫眼—脑复合物免疫组化染色 | 第55-56页 |
| 3.6 视网膜电图(Electroretinograms,ERG) | 第56页 |
| 4 实验结果和说明 | 第56-65页 |
| 4.1 eya基因组拯救质粒 | 第56-57页 |
| 4.2 eya~*GR质粒能够完全拯救eya突变背景下果蝇的生存力和眼睛发育 | 第57-61页 |
| 4.3 eya~*GR质粒能够完全拯救果蝇幼虫眼成虫盘的发育 | 第61-62页 |
| 4.4 eya~*GR无效突变拯救型果蝇具有正常的眼功能 | 第62-63页 |
| 4.5 eya~*GR无效突变拯救型果蝇的感光细胞轴突投射表现正常 | 第63-65页 |
| 5 小结和讨论 | 第65-67页 |
| 第三章 Eya转录激活结构域对于果蝇发育和存活的影响 | 第67-89页 |
| 1 前言 | 第67-68页 |
| 2 实验材料与仪器设备 | 第68-69页 |
| 2.1 果蝇品系 | 第68页 |
| 2.2 细菌菌株及质粒 | 第68页 |
| 2.3 主要试剂 | 第68-69页 |
| 2.3.1 酶和试剂盒 | 第68-69页 |
| 2.3.2 主要溶液 | 第69页 |
| 2.3.3 抗体 | 第69页 |
| 2.4 仪器设备 | 第69页 |
| 3 实验方法 | 第69-73页 |
| 3.1 质粒构建 | 第70页 |
| 3.1.1 胶回收PCR产物 | 第70页 |
| 3.1.2 制备感受态细胞 | 第70页 |
| 3.1.3 DNA质粒小量提取 | 第70页 |
| 3.1.4 DNA质粒大量提取 | 第70页 |
| 3.2 果蝇实验 | 第70-71页 |
| 3.2.1 果蝇饲养和杂交 | 第70-71页 |
| 3.2.2 显微注射及转基因果蝇的检测 | 第71页 |
| 3.3 眼成虫盘RNA的提取 | 第71页 |
| 3.4 RNA中残余DNA的去除 | 第71-72页 |
| 3.5 RT-PCR | 第72页 |
| 3.6 眼成虫盘蛋白的提取 | 第72页 |
| 3.7 Western Blot | 第72-73页 |
| 3.8 幼虫眼成虫盘免疫组化染色 | 第73页 |
| 4 实验结果和说明 | 第73-85页 |
| 4.1 dya~(△PST)GR质粒的构建和验证 | 第73-74页 |
| 4.2 dya~(△PST)GR质粒无法拯救eya突变背景下果蝇的生存力和眼睛发育 | 第74-75页 |
| 4.3 dya~(△PST)在转基因果蝇中有表达(转录水平) | 第75-76页 |
| 4.4 Eya~(△PST)在转基因果蝇中有表达(蛋白水平) | 第76-79页 |
| 4.5 dya~(△PST)GR质粒的嵌合克隆分析 | 第79-82页 |
| 4.6 PST结构域缺失导致Dac表达降低 | 第82-85页 |
| 5 小结和讨论 | 第85-89页 |
| 第四章 Sine oculis参与调节与果蝇眼睛发育相关的多个基因 | 第89-106页 |
| 1 前言 | 第89-91页 |
| 2 实验材料和方法 | 第91-95页 |
| 2.1 实验材料 | 第91-92页 |
| 2.1.1 试剂盒 | 第91页 |
| 2.1.2 主要溶液 | 第91-92页 |
| 2.2 实验方法 | 第92-95页 |
| 2.2.1 染色质免疫共沉淀 | 第92-93页 |
| 2.2.2 测序和序列分析 | 第93页 |
| 2.2.3 qPCR验证 | 第93页 |
| 2.2.4 筛选So全新的靶基因 | 第93-95页 |
| 3 实验结果和说明 | 第95-104页 |
| 3.1 So ChIP-seq结果 | 第95-96页 |
| 3.2 So ChIP-seq峰的富集 | 第96-97页 |
| 3.3 基因本体论分析 | 第97-98页 |
| 3.4 So全新靶基因的筛选 | 第98-104页 |
| 4 小结和讨论 | 第104-106页 |
| 展望和总结 | 第106-110页 |
| 参考文献 | 第110-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 博士期间发表论文 | 第124-125页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第125页 |
