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茶树主要品质性状关键基因的反义基因遗传转化及表达研究

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茶树主要品质性状关键基因的反义基因遗传转化及表达研究
论文目录
 
摘要第13-15 页
ABSTRACT第15-17 页
第一章 绪论第17-51 页
  1.1 S-腺苷甲硫氨酸及其合成酶基因(SAM)第18-20 页
    1.1.1 S-腺苷甲硫氨酸第18 页
    1.1.2 SAM合成酶及其基因第18 页
    1.1.3 SAM的生化功能第18-19 页
      1.1.3.1 转甲基作用第19 页
      1.1.3.2 转巯基作用第19 页
      1.1.3.3 参与多胺合成第19 页
    1.1.4 SAM合成酶基因在植物上的研究第19-20 页
    1.1.5 SAM在茶树上咖啡因生物合成调控中的利用第20 页
  1.2 茶树咖啡因合成酶基因(TCS)第20-21 页
  1.3 反义RNA技术第21-28 页
    1.3.1 反义技术的操作原理第21-22 页
    1.3.2 反义RNA操作的技术要点第22-23 页
      1.3.2.1 反义RNA表达载体构建第22-23 页
      1.3.2.2 转化及表达第23 页
    1.3.3 反义RNA技术在植物研究中的应用第23-28 页
      1.3.3.1 反义RNA技术在作物品质改良中的应用第23-24 页
      1.3.3.2 反义RNA技术在作物杂交育种中的应用第24-25 页
      1.3.3.3 反义RNA技术在园艺植物育种中的应用第25 页
      1.3.3.4 反义RNA技术在果蔬采后生理调控的应用第25-26 页
      1.3.3.5 反义RNA技术在植物抗病中的应用第26-27 页
      1.3.3.6 反义RNA技术在其他植物生理研究中的应用第27-28 页
  1.4 植物转基因技术进展第28-35 页
    1.4.1 直接基因转化系统第28-31 页
      1.4.1.1 基因枪介导基因转化法第29 页
      1.4.1.2 脂质体介导基因转化法第29 页
      1.4.1.3 PEG介导基因转化法第29-30 页
      1.4.1.4 显微注射介导基因转化法第30 页
      1.4.1.5 电激介导基因转化法第30 页
      1.4.1.6 离子束介导基因转化法第30 页
      1.4.1.7 激光微束介导基因转化法第30-31 页
    1.4.2 种质转化系统第31 页
      1.4.2.1 花粉管通道介导基因转化法第31 页
      1.4.2.2 生殖细胞浸泡介导基因转化法第31 页
    1.4.3 外源基因转化系统第31-34 页
      1.4.3.1 根癌农杆菌第32 页
      1.4.3.2 发根农杆菌第32-33 页
      1.4.3.3 农杆菌转化的影响因素第33-34 页
    1.4.4 茶树基因转化研究现状第34-35 页
      1.4.4.1 茶树基因枪遗传转化研究第34 页
      1.4.4.2 茶树农杆菌介导基因转化法第34-35 页
  1.5 儿茶素研究进展第35 页
  1.6 目的和意义第35-36 页
  1.7 研究内容和技术路线第36 页
  1.8 创新之处第36-40 页
  1.9 参考文献第40-51 页
第二章 SAM合成酶基因反义表达载体的构建第51-63 页
  2.1 材料和方法第51-56 页
    2.1.1 材料第51 页
      2.1.1.1 质粒 菌种 材料第51 页
      2.1.1.2 酶及主要试剂第51 页
      2.1.1.3 引物设计第51 页
      2.1.1.4 主要仪器第51 页
    2.1.2 方法第51-56 页
      2.1.2.1 总RNA提取第52 页
      2.1.2.2 cDNA第一链合成第52-53 页
      2.1.2.3 RT-PCR反应第53 页
      2.1.2.4 SAM合成酶反义基因真核表达载体的构建第53-56 页
      2.1.2.5 SAM合成酶反义基因表达载体鉴定第56 页
  2.2 结果与分析第56 页
    2.2.1 茶树RNA的提取第56 页
    2.2.2 RT-PCR目的基因的扩增第56 页
    2.2.3 反义基因表达载体的构建和鉴定第56 页
  2.3 讨论第56-62 页
  2.4 参考文献第62-63 页
第三章 发根农杆菌介导的茶树pCAMBIA1301-SAMS遗传转化第63-79 页
  3.1 材料和方法第64-65 页
    3.1.1 植物材料第64 页
    3.1.2 菌株及转化的质粒第64 页
    3.1.3 三亲交配法第64 页
    3.1.4 农杆菌的PCR验证第64-65 页
    3.1.5 农杆菌活化及转化第65 页
    3.1.6 潮霉素抗性筛选第65 页
    3.1.7 GUS表达组织化学检验第65 页
  3.2 结果与分析第65-66 页
    3.2.1 农杆菌的PCR验证第65 页
    3.2.2 潮霉素抗性筛选第65 页
    3.2.3 不同菌株侵染第65-66 页
    3.2.4 不同共培养培养基第66 页
    3.2.5 不同预培养第66 页
    3.2.6 不同苗龄时间第66 页
    3.2.7 不同外植体第66 页
    3.2.8 GUS染色结果第66 页
  3.3 讨论第66-77 页
  3.4 参考文献第77-79 页
第四章 紫外胁迫对SAM和TCS合成酶基因的表达调控第79-83 页
  4.1 材料和方法第79-80 页
    4.1.1 材料第79 页
      4.1.1.1 材料第79 页
      4.1.1.2 酶及主要试剂第79 页
      4.1.1.3 引物设计第79 页
      4.1.1.4 主要仪器第79 页
    4.1.2 方法第79-80 页
      4.1.2.1 总RNA提取第79 页
      4.1.2.2 cDNA第一链合成第79-80 页
      4.1.2.3 PCR反应条件和反应程序第80 页
      4.1.2.4 琼脂糖电泳分析第80 页
  4.2 结果与分析第80 页
    4.2.1 总RNA提取第80 页
    4.2.2 RT-PCR分析第80 页
  4.3 讨论第80-82 页
  4.4 参考文献第82-83 页
第五章 紫外胁迫对茶树叶片儿茶素积累的影响第83-94 页
  5.1 材料和方法第83-85 页
    5.1.1 材料第83-84 页
    5.1.2 试验处理第84 页
      5.1.2.1 UV-B不同处理时间第84 页
      5.1.2.2 UV-B不同光照强度第84 页
      5.1.2.3 UV-B基因表达处理第84 页
    5.1.3 引物设计第84 页
    5.1.4 样品分析第84 页
    5.1.5 数据分析第84-85 页
    5.1.6 RT-PCR第85 页
  5.2 结果与分析第85-86 页
    5.2.1 茶树叶片儿茶素类含量随UV-B处理时间的变化第85 页
    5.2.2 茶树叶片儿茶素类含量随UV-B处理强度的变化第85-86 页
    5.2.3 RNA提取第86 页
    5.2.4 RT-PCR第86 页
  5.3 讨论第86-92 页
  5.4 参考文献第92-94 页
第六章 总结第94-95 页
  6.1 SAM反义基因构建及其遗传转化第94 页
  6.2 紫外胁迫对咖啡合成中关键酶基因影响第94 页
  6.3 紫外胁迫对儿茶素积累影响第94-95 页
附录:缩略词表第95-96 页

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