论文目录 | |
摘要 | 第13-15
页 |
ABSTRACT | 第15-17
页 |
第一章 绪论 | 第17-51
页 |
1.1 S-腺苷甲硫氨酸及其合成酶基因(SAM) | 第18-20
页 |
1.1.1 S-腺苷甲硫氨酸 | 第18
页 |
1.1.2 SAM合成酶及其基因 | 第18
页 |
1.1.3 SAM的生化功能 | 第18-19
页 |
1.1.3.1 转甲基作用 | 第19
页 |
1.1.3.2 转巯基作用 | 第19
页 |
1.1.3.3 参与多胺合成 | 第19
页 |
1.1.4 SAM合成酶基因在植物上的研究 | 第19-20
页 |
1.1.5 SAM在茶树上咖啡因生物合成调控中的利用 | 第20
页 |
1.2 茶树咖啡因合成酶基因(TCS) | 第20-21
页 |
1.3 反义RNA技术 | 第21-28
页 |
1.3.1 反义技术的操作原理 | 第21-22
页 |
1.3.2 反义RNA操作的技术要点 | 第22-23
页 |
1.3.2.1 反义RNA表达载体构建 | 第22-23
页 |
1.3.2.2 转化及表达 | 第23
页 |
1.3.3 反义RNA技术在植物研究中的应用 | 第23-28
页 |
1.3.3.1 反义RNA技术在作物品质改良中的应用 | 第23-24
页 |
1.3.3.2 反义RNA技术在作物杂交育种中的应用 | 第24-25
页 |
1.3.3.3 反义RNA技术在园艺植物育种中的应用 | 第25
页 |
1.3.3.4 反义RNA技术在果蔬采后生理调控的应用 | 第25-26
页 |
1.3.3.5 反义RNA技术在植物抗病中的应用 | 第26-27
页 |
1.3.3.6 反义RNA技术在其他植物生理研究中的应用 | 第27-28
页 |
1.4 植物转基因技术进展 | 第28-35
页 |
1.4.1 直接基因转化系统 | 第28-31
页 |
1.4.1.1 基因枪介导基因转化法 | 第29
页 |
1.4.1.2 脂质体介导基因转化法 | 第29
页 |
1.4.1.3 PEG介导基因转化法 | 第29-30
页 |
1.4.1.4 显微注射介导基因转化法 | 第30
页 |
1.4.1.5 电激介导基因转化法 | 第30
页 |
1.4.1.6 离子束介导基因转化法 | 第30
页 |
1.4.1.7 激光微束介导基因转化法 | 第30-31
页 |
1.4.2 种质转化系统 | 第31
页 |
1.4.2.1 花粉管通道介导基因转化法 | 第31
页 |
1.4.2.2 生殖细胞浸泡介导基因转化法 | 第31
页 |
1.4.3 外源基因转化系统 | 第31-34
页 |
1.4.3.1 根癌农杆菌 | 第32
页 |
1.4.3.2 发根农杆菌 | 第32-33
页 |
1.4.3.3 农杆菌转化的影响因素 | 第33-34
页 |
1.4.4 茶树基因转化研究现状 | 第34-35
页 |
1.4.4.1 茶树基因枪遗传转化研究 | 第34
页 |
1.4.4.2 茶树农杆菌介导基因转化法 | 第34-35
页 |
1.5 儿茶素研究进展 | 第35
页 |
1.6 目的和意义 | 第35-36
页 |
1.7 研究内容和技术路线 | 第36
页 |
1.8 创新之处 | 第36-40
页 |
1.9 参考文献 | 第40-51
页 |
第二章 SAM合成酶基因反义表达载体的构建 | 第51-63
页 |
2.1 材料和方法 | 第51-56
页 |
2.1.1 材料 | 第51
页 |
2.1.1.1 质粒 菌种 材料 | 第51
页 |
2.1.1.2 酶及主要试剂 | 第51
页 |
2.1.1.3 引物设计 | 第51
页 |
2.1.1.4 主要仪器 | 第51
页 |
2.1.2 方法 | 第51-56
页 |
2.1.2.1 总RNA提取 | 第52
页 |
2.1.2.2 cDNA第一链合成 | 第52-53
页 |
2.1.2.3 RT-PCR反应 | 第53
页 |
2.1.2.4 SAM合成酶反义基因真核表达载体的构建 | 第53-56
页 |
2.1.2.5 SAM合成酶反义基因表达载体鉴定 | 第56
页 |
2.2 结果与分析 | 第56
页 |
2.2.1 茶树RNA的提取 | 第56
页 |
2.2.2 RT-PCR目的基因的扩增 | 第56
页 |
2.2.3 反义基因表达载体的构建和鉴定 | 第56
页 |
2.3 讨论 | 第56-62
页 |
2.4 参考文献 | 第62-63
页 |
第三章 发根农杆菌介导的茶树pCAMBIA1301-SAMS遗传转化 | 第63-79
页 |
3.1 材料和方法 | 第64-65
页 |
3.1.1 植物材料 | 第64
页 |
3.1.2 菌株及转化的质粒 | 第64
页 |
3.1.3 三亲交配法 | 第64
页 |
3.1.4 农杆菌的PCR验证 | 第64-65
页 |
3.1.5 农杆菌活化及转化 | 第65
页 |
3.1.6 潮霉素抗性筛选 | 第65
页 |
3.1.7 GUS表达组织化学检验 | 第65
页 |
3.2 结果与分析 | 第65-66
页 |
3.2.1 农杆菌的PCR验证 | 第65
页 |
3.2.2 潮霉素抗性筛选 | 第65
页 |
3.2.3 不同菌株侵染 | 第65-66
页 |
3.2.4 不同共培养培养基 | 第66
页 |
3.2.5 不同预培养 | 第66
页 |
3.2.6 不同苗龄时间 | 第66
页 |
3.2.7 不同外植体 | 第66
页 |
3.2.8 GUS染色结果 | 第66
页 |
3.3 讨论 | 第66-77
页 |
3.4 参考文献 | 第77-79
页 |
第四章 紫外胁迫对SAM和TCS合成酶基因的表达调控 | 第79-83
页 |
4.1 材料和方法 | 第79-80
页 |
4.1.1 材料 | 第79
页 |
4.1.1.1 材料 | 第79
页 |
4.1.1.2 酶及主要试剂 | 第79
页 |
4.1.1.3 引物设计 | 第79
页 |
4.1.1.4 主要仪器 | 第79
页 |
4.1.2 方法 | 第79-80
页 |
4.1.2.1 总RNA提取 | 第79
页 |
4.1.2.2 cDNA第一链合成 | 第79-80
页 |
4.1.2.3 PCR反应条件和反应程序 | 第80
页 |
4.1.2.4 琼脂糖电泳分析 | 第80
页 |
4.2 结果与分析 | 第80
页 |
4.2.1 总RNA提取 | 第80
页 |
4.2.2 RT-PCR分析 | 第80
页 |
4.3 讨论 | 第80-82
页 |
4.4 参考文献 | 第82-83
页 |
第五章 紫外胁迫对茶树叶片儿茶素积累的影响 | 第83-94
页 |
5.1 材料和方法 | 第83-85
页 |
5.1.1 材料 | 第83-84
页 |
5.1.2 试验处理 | 第84
页 |
5.1.2.1 UV-B不同处理时间 | 第84
页 |
5.1.2.2 UV-B不同光照强度 | 第84
页 |
5.1.2.3 UV-B基因表达处理 | 第84
页 |
5.1.3 引物设计 | 第84
页 |
5.1.4 样品分析 | 第84
页 |
5.1.5 数据分析 | 第84-85
页 |
5.1.6 RT-PCR | 第85
页 |
5.2 结果与分析 | 第85-86
页 |
5.2.1 茶树叶片儿茶素类含量随UV-B处理时间的变化 | 第85
页 |
5.2.2 茶树叶片儿茶素类含量随UV-B处理强度的变化 | 第85-86
页 |
5.2.3 RNA提取 | 第86
页 |
5.2.4 RT-PCR | 第86
页 |
5.3 讨论 | 第86-92
页 |
5.4 参考文献 | 第92-94
页 |
第六章 总结 | 第94-95
页 |
6.1 SAM反义基因构建及其遗传转化 | 第94
页 |
6.2 紫外胁迫对咖啡合成中关键酶基因影响 | 第94
页 |
6.3 紫外胁迫对儿茶素积累影响 | 第94-95
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附录:缩略词表 | 第95-96
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