酿酒酵母HOR2基因缺失突变株的构建及其生物学性质研究



酿酒酵母HOR2基因缺失突变株的构建及其生物学性质研究

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酿酒酵母HOR2基因缺失突变株的构建及其生物学性质研究

论文目录
中文摘要	第1-3页
Abstract	第3-5页
中文文摘	第5-8页
目录	第8-11页
绪论	第11-25页
1 研究背景	第11-14页
· 生物质能概念及其分类	第11-13页
· 燃料乙醇的优点及其发展方向	第13-14页
· 酿酒酵母是传统的乙醇代谢菌株	第14页
2 酿酒酵母育种方法的发展情况	第14-17页
· 常规育种	第15-16页
· 原生质体融合育种	第16页
· 分子育种	第16-17页
3 基因敲除技术	第17-21页
· 基因插入突变	第18页
· RNA干扰	第18-19页
· 基因同源重组	第19-21页
· 基因敲除技术展望	第21页
4 3-磷酸甘油脱氢酶和3-磷酸甘油酯酶对甘油代谢的影响	第21-23页
· 3-磷酸甘油脱氢酶	第21-22页
· 3-磷酸甘油酯酶	第22-23页
5 本研究目的意义	第23-25页
第一章材料与方法	第25-41页
第一节实验材料	第25-31页
· 菌种与质粒	第25页
· 培养基	第25-26页
· 寡聚核苷酸引物	第26-27页
· 酶和试剂	第27页
· 主要仪器	第27-28页
· 试剂与溶液的配制	第28-31页
第二节实验方法	第31-41页
· Cre/LoxP系统	第31页
· 酵母YS2基因组DNA的提取	第31-32页
· 聚合酶链式反应(PCR)	第32页
· 通过菌落PCR来验证酵母菌落	第32-33页
· 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备	第33页
· 质粒pUG6与pSH65的转化	第33-34页
· 碱裂解法制取pUG6及pSH65质粒DNA	第34-35页
· UNIQ-10柱式DNA胶回收试剂盒回收DNA	第35-36页
· 乙醇沉淀DNA	第36页
· 平板影印法	第36页
· LiAc/SS载体DNA/PEG化学高效转化法	第36-38页
· 突变株生理特性的实验	第38页
· 突变株乙醇代谢的发酵测定实验	第38-39页
· 突变株发酵甘油的测定	第39-41页
第二章结果与讨论	第41-57页
第一节实验结果	第41-55页
· 酵母出发菌(YS2)基因组DNA的提取	第41页
· 酵母YS2的HOR2基因的存在性验证	第41-42页
· 质粒pUG6、pSH65的扩增及鉴定	第42-45页
· 质粒pUG6、pSH65的扩增	第42-43页
· 质粒pUG6的酶切验证	第43-44页
· 质粒pSH65的酶切验证	第44-45页
· 构建HOR2基因敲除组件	第45-47页
· HOR2基因敲除组件的构建	第45-46页
· 基因敲除组件的测序验证	第46-47页
· HOR2基因的敲除	第47-51页
· HOR2基因敲除组件的转化及其克隆子筛选	第47-48页
· 克隆子验证	第48-49页
· kan~T筛选标记的切除	第49-51页
· HOR2等位基因的敲除	第51页
· YS2-HOR2突变株生理特性试验	第51-52页
· 突变株生长状况	第51-52页
· 突变株的稳定性实验	第52页
· 突变株发酵液甘油和乙醇产量的测定	第52-55页
· 突变株YS2-HOR2发酵液甘油产量测定	第52-53页
· 突变株YS2-HOR2发酵液乙醇含量的测定	第53-55页
第二节讨论	第55-57页
第三章结论	第57-59页
附录1 波美度、糖度、比重换算表	第59-61页
附录2 主要符号对照表	第61-63页
参考文献	第63-70页
攻读学位期间承担的科研任务与主要成果	第70-71页
致谢	第71-72页
个人简历	第72页

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