论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一章 水通道蛋白AQP8 在卵巢中的功能研究 | 第11-42页 |
| 第一部分 引言 | 第11-18页 |
| 一、水通道蛋白的发现、命名与分类 | 第11页 |
| 二、水通道蛋白的结构和水转运功能 | 第11-14页 |
| 三、水通道蛋白的表达和生理功能 | 第14-15页 |
| 四、AQP8 的发现、表达及生理功能 | 第15页 |
| 五、卵巢和卵泡的结构与功能 | 第15-16页 |
| （一） 卵泡的发育过程 | 第15-16页 |
| （二） 颗粒细胞在卵泡中的功能 | 第16页 |
| 六、本研究的目的和意义 | 第16-18页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第18-29页 |
| 一、实验材料 | 第18-19页 |
| （一） 主要生化和分子生物学试剂 | 第18页 |
| （二） 主要实验仪器和数据分析软件 | 第18-19页 |
| （三） 实验动物 | 第19页 |
| 二、实验方法 | 第19-28页 |
| （一） 小鼠的生育能力分析 | 第19页 |
| （二） 小鼠的排卵和超数排卵分析 | 第19-21页 |
| （三） 卵巢的组织学检测 | 第21-23页 |
| （四） 卵巢颗粒细胞的分离和培养 | 第23页 |
| （五） RT-PCR 检测 | 第23-25页 |
| （六） 免疫印迹 | 第25-27页 |
| （七） 免疫组化分析 | 第27页 |
| （八） 水通透性测定 | 第27-28页 |
| （九） 细胞凋亡检测 | 第28页 |
| 三、统计学分析 | 第28-29页 |
| 第三部分 实验结果 | 第29-39页 |
| 一、AQP8~(-/-)小鼠的繁殖能力强于野生型 | 第29-30页 |
| （一） AQP8~(-/-)小鼠同基因型交配产仔多于野生型 | 第29页 |
| （二） 杂交显示繁殖力的差异取决于雌性小鼠 | 第29-30页 |
| 二、AQP8~(-/-)小鼠的排卵能力强于野生型 | 第30-31页 |
| （一） AQP8~(-/-)小鼠的排卵数较多 | 第30页 |
| （二） AQP8~(-/-)小鼠的激素刺激排卵数较多 | 第30-31页 |
| （三） AQP8~(-/-)小鼠排卵的卵丘颗粒细胞覆盖率高 | 第31页 |
| 三、AQP8~(-/-)小鼠卵巢的黄体数多于野生型 | 第31-32页 |
| 四、AQP8 在小鼠卵巢颗粒细胞的表达 | 第32-35页 |
| （一） AQP8 蛋白在小鼠卵巢的定位 | 第33页 |
| （二） 小鼠卵巢颗粒细胞的原代分离与培养 | 第33-34页 |
| （三） AQP8 m RNA 在小鼠颗粒细胞的表达 | 第34-35页 |
| （四） AQP8 蛋白在小鼠颗粒细胞的表达 | 第35页 |
| 五、AQP8 敲除导致卵巢排卵增加的机制研究 | 第35-36页 |
| （一） AQP8~(-/-)颗粒细胞的水转运功能降低 | 第35-36页 |
| （二） AQP8~(-/-)颗粒细胞的凋亡率降低 | 第36页 |
| 六、AQP8 敲除鼠卵巢中出现了增多的多卵卵泡 | 第36-39页 |
| （一） AQP8~(-/-)卵巢中多卵卵泡的数目增加 | 第36-37页 |
| （二） AQP8~(-/-)卵巢中多卵卵泡的数目随年龄增长而减少 | 第37-39页 |
| 第四部分 讨论 | 第39-41页 |
| 一、AQP8 在雌性生殖系统的新功能 | 第39页 |
| 二、AQP8 影响卵巢排卵的机制和意义 | 第39-40页 |
| 三、多卵卵泡的成因及与AQP8 的关系 | 第40-41页 |
| 第五部分 结论 | 第41-42页 |
| 第二章 AQP4-A25Q 突变基因敲入小鼠模型的建立 | 第42-74页 |
| 第一部分 引言 | 第42-49页 |
| 一、AQP4 的发现、表达与功能 | 第42页 |
| 二、AQP4 正交列阵结构的研究 | 第42-45页 |
| （一） AQP4 亚型M1 和M23 在细胞膜上不同的分布形式及各自特点 | 第43-45页 |
| （二） AQP4 的晶体结构 | 第45页 |
| （三） 影响正交列阵结构形成的因素 | 第45页 |
| 三、基因打靶技术 | 第45-47页 |
| （一） 基因打靶载体构建策略 | 第46-47页 |
| （二） 基因打靶技术的一般流程 | 第47页 |
| 四、本研究的目的和意义 | 第47-49页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第49-61页 |
| 一、实验材料 | 第49-50页 |
| （一） 主要生化和分子生物学试剂 | 第49页 |
| （二） 主要实验仪器 | 第49页 |
| （三） 实验动物 | 第49-50页 |
| 二、实验方法 | 第50-61页 |
| （一） 基因敲入载体的构建及制备 | 第50-54页 |
| （二） 胚胎干细胞的培养及操作 | 第54-55页 |
| （三） 胚胎的显微操作 | 第55-57页 |
| （四） 基因敲入小鼠的传代和获得 | 第57-60页 |
| （五） 基因敲入小鼠的鉴定 | 第60-61页 |
| 第三部分 实验结果 | 第61-71页 |
| 一、AQP4-A25Q 基因敲入载体的构建 | 第61-65页 |
| （一） AQP4-A25Q 基因敲入策略 | 第61-62页 |
| （二） 载体构建过程 | 第62-65页 |
| 二、AQP4-A25Q 基因敲入小鼠模型的产生 | 第65-68页 |
| （一） ES 细胞转染及筛选鉴定结果 | 第65-66页 |
| （二） AQP4-A25Q-neo 小鼠杂合体及纯合体的鉴定 | 第66-67页 |
| （三） 与Cre 转基因鼠杂交后代鉴定 | 第67-68页 |
| 三、AQP4-A25Q 基因敲入小鼠的鉴定 | 第68-71页 |
| （一） AQP4 m RNA 表达的RT-PCR 检测 | 第68-69页 |
| （二） AQP4 的cDNA 序列测定 | 第69页 |
| （三） AQP4 蛋白表达的免疫印迹检测 | 第69页 |
| （四） AQP4 蛋白分布的免疫组化分析 | 第69-71页 |
| 第四部分 讨论 | 第71-73页 |
| 一、AQP4-A25Q 突变基因敲入小鼠模型的建立 | 第71页 |
| 二、AQP4 正交列阵结构的后续研究计划 | 第71-73页 |
| 第五部分 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 英文缩写词 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 作者简历 | 第84-85页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第85
页 |
