论文目录 | |
| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-44页 |
| 一 小麦抗赤霉病研究进展 | 第11-32页 |
| 1 禾谷镰刀菌及其毒素研究 | 第11-21页 |
| · 小麦赤霉病的发生及危害 | 第11-13页 |
| · 禾谷镰刀菌分类 | 第13页 |
| · 禾谷镰刀菌毒素的种类 | 第13-15页 |
| · 禾谷镰刀菌毒素的生物合成 | 第15-17页 |
| · DON毒素对谷物及谷物类食品的污染 | 第17页 |
| · DON对人和动物的毒性 | 第17-19页 |
| · DON对小麦的生物学活性极其在赤霉病病程中的作用 | 第19-21页 |
| 2 小麦抗赤霉病研究 | 第21-32页 |
| · 小麦抗赤霉病类型及其遗传机制 | 第21-23页 |
| · 小麦赤霉病抗源的鉴定与筛选 | 第23-24页 |
| · 小麦赤霉病抗性的QTL分析 | 第24-27页 |
| · 小麦抗镰刀菌毒素积累的自然机制 | 第27-32页 |
| 二 基因芯片在植物研究中的应用 | 第32-40页 |
| 1 基因芯片概念及其技术原理 | 第33页 |
| 2 基因芯片制作技术流程 | 第33-35页 |
| · 芯片的设计与制备 | 第33-34页 |
| · 靶基因的制备和标记 | 第34-35页 |
| · 芯片杂交与信号检测 | 第35页 |
| 3 基因芯片在植物研究中的应用 | 第35-40页 |
| · 基因表达情况分析 | 第35-37页 |
| · 特定基因筛选和克隆 | 第37-38页 |
| · 单核苷酸多态性分析 | 第38-39页 |
| · 转基因植物检测 | 第39页 |
| · 其他方面应用 | 第39-40页 |
| 三 植物中的尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶 | 第40-44页 |
| 第二部分 研究报告 | 第44-107页 |
| 第一章 利用小麦基因芯片研究DON诱导的抗赤霉病小麦品种望水白穗组织基因表达谱 | 第44-63页 |
| 一 材料和方法 | 第45-54页 |
| 1 材料 | 第45页 |
| · 抗赤霉病小麦农家品种望水白 | 第45页 |
| · Affymetrix小麦基因芯片 | 第45页 |
| 2 接种和取样方法 | 第45页 |
| 3 芯片杂交探针制备 | 第45-49页 |
| · 总RNA的提取及纯化 | 第45-46页 |
| · 第一链cDNA合成 | 第46-47页 |
| · 第二链cDNA合成 | 第47页 |
| · 纯化双链cDNA | 第47-48页 |
| 3.5. 生物素标记cRNA合成 | 第48页 |
| · cRNA质控 | 第48页 |
| · cRNA的含量计算 | 第48页 |
| · 片段化cRNA | 第48-49页 |
| 4 芯片杂交 | 第49页 |
| 5 芯片洗脱、染色和扫描 | 第49-50页 |
| 6 杂交结果数据处理 | 第50-51页 |
| 7 侯选基因半定量RT-PCR | 第51-54页 |
| · 接种和取样方法 | 第51页 |
| · 不同处理材料RNA的提取 | 第51页 |
| · 半定量RT-PCR | 第51-54页 |
| 二 结果与分析 | 第54-61页 |
| 1 RNA质量检测 | 第54页 |
| 2 芯片杂交结果 | 第54-59页 |
| · 抗赤霉病小麦品种望水白穗部DON诱导后上调表达的基因 | 第56-58页 |
| · 抗赤霉病小麦品种望水白穗部DON诱导后下调表达的基因 | 第58-59页 |
| 3. 部分差异表达基因的半定量RT-PCR分析 | 第59-61页 |
| 三 讨论 | 第61-63页 |
| 第二章 小麦品种望水白TaUGT3全长基因的克隆及其功能分析 | 第63-107页 |
| 一 材料和方法 | 第64-85页 |
| 1 材料 | 第64-65页 |
| · 植物材料及生长条件 | 第64页 |
| · DON诱导后24和48小时段混合望水白穗部cDNA文库 | 第64页 |
| · 其它菌种材料和载体 | 第64页 |
| · 主要生化试剂及仪器设备 | 第64-65页 |
| 2 接种和取样 | 第65页 |
| · 接种 | 第65页 |
| · 取样 | 第65页 |
| 3 望水白TaUGT3全长基因的克隆 | 第65-66页 |
| · cDNA文库筛选引物设计 | 第65-66页 |
| · cDNA文库中筛选PCR反应体系及反应程序 | 第66页 |
| · cDNA文库中侯选基因的筛选方法 | 第66页 |
| 4 侯选基因插入片段大小检测 | 第66-67页 |
| · λTriplEx sequencing primer(SP) | 第66-67页 |
| · PCR反应体系及反应程序 | 第67页 |
| 5 阳性单克隆测序及核苷酸序列比较分析 | 第67-68页 |
| · 阳性单克隆质粒DNA的小量提取及纯化 | 第67-68页 |
| · 阳性单克隆质粒测序及核苷酸序列比较分析 | 第68页 |
| 6 侯选基因单克隆半定量RT-PCR | 第68-69页 |
| · 不同处理材料RNA的提取 | 第68-69页 |
| · 半定量RT-PCR | 第69页 |
| 7 侯选基因同源序列在小麦染色体上的定位 | 第69-72页 |
| · 小麦中国春缺体-四体和缺失系DNA的提取 | 第69-70页 |
| · PCR反应引物 | 第70页 |
| · PCR反应体系及程序 | 第70-71页 |
| · PAGE电泳 | 第71页 |
| · PAGE染色 | 第71-72页 |
| 8 侯选基因的亚细胞定位 | 第72-76页 |
| · GFP融合载体的构建 | 第72-75页 |
| · 利用基因枪轰击GFP融合载体到洋葱表皮细胞 | 第75-76页 |
| 9 植物表达载体的构建及转化拟南芥 | 第76-80页 |
| · 植物表达载体的构建 | 第76-78页 |
| · 农杆菌转化拟南芥 | 第78页 |
| · 阳性拟南芥转化株的筛选和验证 | 第78-80页 |
| 10 GUS染色 | 第80页 |
| · 试剂及其配制 | 第80页 |
| · 染色及镜检 | 第80页 |
| 11 Northern杂交 | 第80-84页 |
| · 试剂及其配制 | 第80-82页 |
| · RNA的提取 | 第82页 |
| · RNA甲醛琼脂糖凝胶变性电泳 | 第82-83页 |
| · Northern转膜 | 第83页 |
| · 探针的制备 | 第83-84页 |
| · DIG标记探针 | 第84页 |
| · 杂交 | 第84页 |
| · 洗膜与显色 | 第84页 |
| 12 TaUGT3阳性拟南芥转化株的抗DON功能验证 | 第84-85页 |
| 二 结果与分析 | 第85-105页 |
| 1 望水白TaUGT3全长基因的克隆 | 第85-90页 |
| · cDNA文库筛选结果 | 第85-86页 |
| · TaUGT3全长基因序列及其特征分析 | 第86-90页 |
| 2 TaUGT3基因同源序列在感赤霉病小麦品种中的克隆 | 第90-93页 |
| 3 TaUGT3基因的半定量RT-PCR | 第93-94页 |
| 4 TaUGT3基因同源序列在小麦染色体上的定位 | 第94-95页 |
| 5 TaUGT3基因洋葱细胞亚细胞定位分析 | 第95-97页 |
| 6 TaUGT3基因植物表达载体的构建及转化拟南芥 | 第97-100页 |
| · 植物表达载体的构建 | 第97-99页 |
| · 转基因植株的筛选和验证 | 第99-100页 |
| 7 GUS染色 | 第100-101页 |
| 8 Northern杂交 | 第101页 |
| 9 TaUG3T阳性转化株的抗DON功能鉴定 | 第101-105页 |
| 三 讨论 | 第105-107页 |
| 全文结论 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-123页 |
| 附录 | 第123-129页 |
| 致谢 | 第129
页 |
