论文目录 | |
| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略语表 | 第13-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-38页 |
| 1 ABA与植物抗氧化防护的关系 | 第16-18页 |
| · 植物对环境胁迫的响应 | 第16页 |
| · ABA对植物抗氧化防护的调控 | 第16-18页 |
| 2 ABA信号转导机理 | 第18-22页 |
| · ABA诱导ROS的产生 | 第19-21页 |
| · Ca~(2+)参与了细胞中ABA信号转导 | 第21页 |
| · 蛋白质可逆磷酸化作用 | 第21-22页 |
| 3 促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)研究 | 第22-36页 |
| · MAPK级联系统 | 第22-24页 |
| · MAPK结构和生化特性 | 第24-26页 |
| · 动物及酵母中的MAPK分类及功能研究 | 第26页 |
| · 植物体中的MAPK分类 | 第26-27页 |
| · MAPK活性的调控 | 第27-29页 |
| · MAPK与细胞骨架蛋白的相互作用 | 第29-30页 |
| · MAPK在细胞中的定位 | 第30页 |
| · MAPK在生物体的功能 | 第30-35页 |
| · MAPK基因克隆 | 第35-36页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第36-37页 |
| 5 主要研究内容 | 第37-38页 |
| 第二章 ABA诱导的玉米MAPK(ZmMPK3、p46MAPK)基因克隆及其序列分析 | 第38-63页 |
| 1 材料与方法 | 第40-52页 |
| · 供试材料 | 第40-42页 |
| · 玉米中MAPK全长基因的克隆策略 | 第42-43页 |
| · 玉米幼苗总RNA提取 | 第43-44页 |
| · RNA产率和质量鉴定 | 第44页 |
| · 电泳检查RNA完整性 | 第44页 |
| · cDNA第一条链的合成(RNA反转录cDNA) | 第44-45页 |
| · MAPK保守序列的扩增 | 第45页 |
| · PCR产物的纯化与回收 | 第45-46页 |
| · 目的片段和载体的连接 | 第46页 |
| · 重组质粒的转化 | 第46页 |
| · 重组质粒的鉴定 | 第46-47页 |
| · MAPK 5’端基因的克隆[5’-RACE(5'Rapid Amplification of cDNA Ends)] | 第47-50页 |
| · MAPK 3’端基因的克隆[3’-RACE(3'rapid amplification of cDNA ends)] | 第50-51页 |
| · MAPK全长基因的克隆 | 第51-52页 |
| · 基因序列分析 | 第52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-61页 |
| · RNA的质量检测结果 | 第52-53页 |
| · 玉米MAPK保守片段的扩增 | 第53页 |
| · ZmMPK3基因的克隆 | 第53-55页 |
| · p46MAPK基因的克隆 | 第55-58页 |
| · 玉米两种MAPK:ZmMPK3和ZmMPK5的生物信息学分析 | 第58-61页 |
| · 玉米两种MAPK系统进化树分析 | 第61页 |
| 3 小结 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-63页 |
| 第三章 ZmMPK3和ZmMPK5的原核表达、活性检测及抗体的制备 | 第63-81页 |
| 1 材料与方法 | 第64-70页 |
| · 材料 | 第64-65页 |
| · 原核表达载体pET-MAPK和pGEX-MAPK的构建 | 第65-67页 |
| · His-tag-MAPK融合蛋白的原核表达 | 第67页 |
| · His-tag-MAPK融合蛋白的检测 | 第67页 |
| · GST-MAPK融合蛋白的原核表达及检测 | 第67页 |
| · 细菌的裂解和包涵体的制备 | 第67-68页 |
| · 融合蛋白的亲和纯化 | 第68-69页 |
| · 体外表达的MAPK融合蛋白激酶活性的检测 | 第69页 |
| · 抗体的制备 | 第69-70页 |
| · SDS-PAGE和Western-Blot | 第70页 |
| 2 结果与分析 | 第70-78页 |
| · 原核表达载体pET-MAPK和pGEX-MAPK的构建 | 第70-73页 |
| · His-tag-MAPK融合蛋白的诱导表达 | 第73-74页 |
| · GST-MAPK融合蛋白的诱导表达及纯化 | 第74-76页 |
| · 原核表达蛋白的激酶活性检测 | 第76-77页 |
| · 抗体的专一性检测 | 第77-78页 |
| 3 小结 | 第78页 |
| 4 讨论 | 第78-81页 |
| 第四章 多种非生物胁迫对ZmMPK3和ZmMPK5转录水平和激酶水平的调控 | 第81-100页 |
| 1 材料与方法 | 第83-87页 |
| · 材料 | 第83-84页 |
| · 植物激素及非生物胁迫处理 | 第84页 |
| · 引物设计 | 第84-85页 |
| · RNA提取及反转录cDNA | 第85页 |
| · 荧光定量RT-PCR | 第85-86页 |
| · 粗酶液提取 | 第86页 |
| · SDS-PAGE和Western-Blot | 第86页 |
| · 免疫共沉淀凝胶激酶分析 | 第86-87页 |
| 2 结果与分析 | 第87-97页 |
| · ZmMPK3和ZmMPK5组织特异性表达分析 | 第87-88页 |
| · 多种胁迫对ZmMPK3在mRNA水平、蛋白水平及激酶活性的调控 | 第88-94页 |
| · 非生物胁迫对ZmMPK5在转录水平及激酶活性的诱导 | 第94-97页 |
| 3 小结 | 第97页 |
| 4 讨论 | 第97-100页 |
| 第五章 ZmMPK3和ZmMPK5的亚细胞定位 | 第100-110页 |
| 1 材料与方法 | 第101-104页 |
| · 材料 | 第101-102页 |
| · 瞬间表达载体pXZMPK3和pXZMPK5的构建 | 第102-103页 |
| · 玉米原生质体的分离 | 第103页 |
| · 质粒提取 | 第103页 |
| · PEG融合法转化玉米原生质体 | 第103-104页 |
| · 显微镜观察 | 第104页 |
| 2 结果与分析 | 第104-107页 |
| · 瞬间表达载体pXZMPK3和pXZMPK5的构建 | 第104-105页 |
| · 玉米原生质体的分离 | 第105页 |
| · ZmMPK3和ZmMPK5在玉米原生质体的亚细胞定位 | 第105-106页 |
| · 玉米原生质体瞬间表达载体的转化效率 | 第106-107页 |
| 3 小结 | 第107-108页 |
| 4 讨论 | 第108-110页 |
| 第六章 ZmMPK3对玉米抗氧化防护的调控 | 第110-118页 |
| 1 材料与方法 | 第112-114页 |
| · 材料 | 第112页 |
| · ABA处理实验 | 第112页 |
| · 玉米原生质体的提取、表达载体的转化和培养 | 第112页 |
| · 原生质体RNA的提取 | 第112页 |
| · 原生质体蛋白的提取 | 第112-113页 |
| · RT-PCR引物设计 | 第113页 |
| · 抗氧化酶活性的测定 | 第113-114页 |
| 2 结果与分析 | 第114-116页 |
| · ABA对ZmMPK3和ZmMPK5的激活及对抗氧化基因表达的影响 | 第114页 |
| · ZmMPK3过表达对玉米原生质体抗氧化防护的影响 | 第114-116页 |
| 3 小结 | 第116-117页 |
| 4 讨论 | 第117-118页 |
| 全文结论 | 第118-122页 |
| 1 研究小结 | 第118-119页 |
| 2 创新之处 | 第119-120页 |
| 3 存在的问题与展望 | 第120-122页 |
| 参考文献 | 第122-132页 |
| 致谢 | 第132-134页 |
| 攻读博士期间发表的学术论文 | 第134
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