论文目录 | |
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-31页 |
| · 细胞凋亡 | 第11-14页 |
| · 概述 | 第11页 |
| · 细胞凋亡的特点 | 第11-12页 |
| · 细胞凋亡的机制 | 第12-13页 |
| · 细胞凋亡的意义 | 第13-14页 |
| · 秀丽线虫-生物学研究理想的模式生物 | 第14-19页 |
| · 秀丽线虫的生物学特性 | 第14-15页 |
| · 秀丽线虫中细胞凋亡的特点和机制 | 第15-19页 |
| · 染色体 DNA 降解的研究现状 | 第19-25页 |
| · DFF40 --最早被发现参与细胞凋亡的核酸酶 | 第19-20页 |
| · DCR-1 --线虫中启动 DNA 降解的关键核酸酶 | 第20-21页 |
| · EndoG/CPS-6 --线粒体中参与凋亡细胞 DNA 降解的核酸酶 | 第21-22页 |
| · CRN 家族 | 第22页 |
| · DNase II 家族核酸酶 | 第22-23页 |
| · 线虫中染色体 DNA 降解的模型 | 第23-24页 |
| · 染色体 DNA 降解异常导致的疾病 | 第24-25页 |
| · Dicer 核酸酶的研究现状 | 第25-29页 |
| · 概述 | 第25-26页 |
| · Dicer 蛋白 RNase 活性与结构的关系 | 第26-27页 |
| · 线虫 DCR-1 蛋白在细胞凋亡中的功能转变 | 第27-29页 |
| · 本文的研究目的和主要内容 | 第29-31页 |
| 第2章 具有 DNase 活性的 tDCR-1 蛋白制备条件摸索 | 第31-65页 |
| · 本章引论 | 第31-32页 |
| · 实验材料 | 第32-34页 |
| · 菌株 | 第32-33页 |
| · 细胞 | 第33页 |
| · 载体 | 第33页 |
| · 试剂 | 第33-34页 |
| · 实验方法 | 第34-47页 |
| · 克隆构建 | 第34-35页 |
| · 大肠杆菌表达与纯化 | 第35-38页 |
| · 包涵体变复性方法 | 第38-39页 |
| · 体外转录翻译系统表达纯化蛋白 | 第39-40页 |
| · 昆虫细胞表达与纯化 | 第40-43页 |
| · 蛋白电泳检测方法 | 第43-45页 |
| · DNase 活性的测定 | 第45页 |
| · CED-3 纯化与活性测定 | 第45-47页 |
| · 结果与讨论 | 第47-65页 |
| · 大肠杆菌表达 tDCR-1 结果 | 第47-52页 |
| · tDCR-1 包涵体变复性结果 | 第52-55页 |
| · 体外转录翻译系统表达 DCR-1 结果 | 第55-60页 |
| · 昆虫细胞表达 tDCR-1 结果 | 第60-63页 |
| · 小结 | 第63-65页 |
| 第3章 抑制 tDCR-1 活性的关键临界区域及抑制机理研究 | 第65-91页 |
| · 本章引论 | 第65-66页 |
| · 实验材料 | 第66-67页 |
| · 线虫 | 第66页 |
| · 载体 | 第66页 |
| · 试剂 | 第66-67页 |
| · 实验方法 | 第67-72页 |
| · 克隆构建 | 第67-69页 |
| · 体外转录翻译系统表达蛋白 | 第69页 |
| · DNase 活性测定 | 第69页 |
| · 体外 TUNEL 实验 | 第69-70页 |
| · 显微注射构建转基因线虫 | 第70-72页 |
| · 体内细胞死亡数目检测 | 第72页 |
| · 结果与讨论 | 第72-91页 |
| · N 端各结构域对 tDCR-1 蛋白 DNase 活性抑制效果分析 | 第72-80页 |
| · 抑制 tDCR-1 DNase 活性的关键临界区域鉴定 | 第80-83页 |
| · 二级结构依赖的抑制机理分析 | 第83-87页 |
| · 其他不相关序列对 tDCR-1 蛋白 DNase 活性的抑制 | 第87-90页 |
| · 小结 | 第90-91页 |
| 第4章 CED-3 激活的 DCR-1 蛋白与 DNA 结合能力分析 | 第91-110页 |
| · 本章引论 | 第91-93页 |
| · 实验材料 | 第93页 |
| · 实验方法 | 第93-97页 |
| · 克隆构建 | 第93-94页 |
| · 昆虫细胞表达纯化蛋白 | 第94页 |
| · 凝胶迁移法（EMSA）检测双链 DNA 的结合 | 第94-96页 |
| · Pull down 法检测与质粒 DNA 的结合 | 第96-97页 |
| · 拓扑异构酶 I 处理超螺旋质粒 DNA | 第97页 |
| · 结果与讨论 | 第97-110页 |
| · DCR-1 蛋白与短链 dsDNA 的结合 | 第97-100页 |
| · DCR-1 蛋白与超螺旋质粒 DNA 的结合 | 第100-101页 |
| · DNA 的构象对 DCR-1 活性的影响 | 第101-102页 |
| · DCR-1 蛋白结合 DNA 的区域鉴定 | 第102-108页 |
| · 小结 | 第108-110页 |
| 第5章 通过结构模拟探讨 DCR-1 蛋白功能转变的机制 | 第110-121页 |
| · 本章引论 | 第110页 |
| · 实验材料 | 第110页 |
| · 实验方法 | 第110-112页 |
| · 结构建模 | 第110-111页 |
| · RNase 活性检测 | 第111-112页 |
| · 新 RNase III 克隆构建 | 第112页 |
| · 结果 | 第112-118页 |
| · 结构建模结果 | 第112-115页 |
| · RNase 活性检测结果 | 第115-116页 |
| · 新 RNase III 蛋白 DNase 活性检测结果 | 第116-118页 |
| · 讨论 | 第118-121页 |
| 第6章 论文总结与展望 | 第121-124页 |
| 参考文献 | 第124-133页 |
| 致谢 | 第133-135页 |
| 附录 A 常用试剂和储液配制方法 | 第135-136页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第136页 |
