论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 英文缩略语 | 第11-16页 |
| 第一部分: 胶质瘤内的GAL-9/TIM-3/IL-6信号促进肿瘤生长并调节肿瘤免疫微环境 | 第16-54页 |
| 1 前言 | 第16-18页 |
| 2 材料和方法 | 第18-39页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第19-20页 |
| 2.1.3 伦理和人类标本 | 第20-21页 |
| 2.1.4 细胞培养 | 第21页 |
| 2.1.5 原代细胞提取和培养 | 第21-22页 |
| 2.1.6 人外周血单个核细胞分离和培养 | 第22-23页 |
| 2.1.7 细胞处理 | 第23页 |
| 2.1.8 条件培养基(CM)的制备 | 第23页 |
| 2.1.9 RNA分离和逆转录定量PCR(RT-QPCR) | 第23-24页 |
| 2.1.10 蛋白质提取和蛋白质印迹 | 第24-28页 |
| 2.1.11 免疫组织化学 | 第28-31页 |
| 2.1.12 免疫细胞化学 | 第31-32页 |
| 2.1.13 TIM-3表达和生存分析的数据集准备 | 第32页 |
| 2.1.14 基因本体论(GO)分析,基因集富集分析(GSEA)和基因集变异分析(GVEA) | 第32-33页 |
| 2.1.15 慢病毒介导的TIM-3过表达 | 第33页 |
| 2.1.16 小干扰RNA (siRNA)和细胞转染 | 第33-34页 |
| 2.1.17 体外细胞增殖试验 | 第34-35页 |
| 2.1.18 集落形成实验 | 第35页 |
| 2.1.19 划痕实验 | 第35-36页 |
| 2.1.20 细胞侵袭测定 | 第36-37页 |
| 2.1.21 皮下异种移植和颅内原位异种移植 | 第37-38页 |
| 2.1.22 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第38页 |
| 2.1.23 统计分析 | 第38-39页 |
| 3 结果 | 第39-44页 |
| 3.1 胶质母细胞瘤患者TIM-3表达升高 | 第39-40页 |
| 3.2 TIM-3在体外调节胶质瘤细胞的增殖,迁移和侵袭能力 | 第40-41页 |
| 3.3 TIM-3是胶质瘤细胞体内致瘤性所必需的 | 第41页 |
| 3.4 阻断GAL-9可减弱由TIM-3过表达诱导的神经胶质瘤细胞的增殖,迁移和侵袭 | 第41-42页 |
| 3.5 TIM-3通过NF-κB介导的IL-6信号传导通路调节神经胶质瘤微环境,破坏肿瘤免疫应答 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-45页 |
| 5 结论 | 第45-54页 |
| 第二部分: 胶质瘤GAL-9/TIM-3/IL-6信号促进肿瘤相关巨噬细胞向M2型分化并诱导其向肿瘤组织迁移 | 第54-64页 |
| 1 前言 | 第54-56页 |
| 2 材料和方法 | 第56-59页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第56页 |
| 2.1.2 细胞系和细胞培养 | 第56页 |
| 2.1.3 RNA分离和逆转录定量PCR(RT-QPCR) | 第56-57页 |
| 2.1.4 微环境细胞群计数法和CIBERSORT分析 | 第57页 |
| 2.1.5 THP1细胞诱导肿瘤相关巨噬细胞(TAMs) | 第57页 |
| 2.1.6 细胞迁移和侵袭测定 | 第57页 |
| 2.1.7 统计分析 | 第57-59页 |
| 3 结果 | 第59-60页 |
| 3.1 胶质瘤细胞GAL-9/TIM-3信号传导诱导THP1衍生的巨噬细胞向M2 TAM的表型变化并促进其迁移 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-61页 |
| 5 结论 | 第61-64页 |
| 第三部分: IL-6家族受体基因OSMR过度表达调节胶质母细胞瘤中的局部免疫应答 | 第64-85页 |
| 1 前言 | 第64-65页 |
| 2 材料和方法 | 第65-68页 |
| 2.1.1 伦理和人类标本 | 第65-66页 |
| 2.1.2 RNA分离和逆转录定量PCR(RT-QPCR) | 第66页 |
| 2.1.3 蛋白质提取和蛋白质印迹 | 第66页 |
| 2.1.4 免疫组织化学 | 第66页 |
| 2.1.5 0SMR表达和生存分析的数据集准备 | 第66-67页 |
| 2.1.6 基因本体论(GO)分析,基因集富集分析(GSEA)和基因集变异分析(GVEA) | 第67页 |
| 2.1.7 统计分析 | 第67-68页 |
| 3 结果 | 第68-73页 |
| 3.1 对胶质瘤中细胞因子受体活性相关基因的分析得出OSMR在GBM中表达升高 | 第68页 |
| 3.2 0SMR表达升高是胶质瘤恶性进展的独立预测因子 | 第68-69页 |
| 3.3 在胶质瘤样本中验证了OSMR表达量增高,可作为GBM患者不同亚型的评价指标 | 第69-70页 |
| 3.4 在GBM中OSMR可以预测MGMT启动子甲基化状态及放疗和化疗敏感性的指标 | 第70-71页 |
| 3.5 0SMR表达与胶质瘤微环境中肿瘤纯度,免疫和基质评分以及免疫和基质细胞群的有关 | 第71页 |
| 3.6 在GBM中OSMR与局部免疫应答和细胞外基质过程的调节有关 | 第71-73页 |
| 4 讨论 | 第73-74页 |
| 5 结论 | 第74-85页 |
| 本研究创新性的自我评价 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-95页 |
| 综述 | 第95-106页 |
| 参考文献 | 第102-106页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107-109页 |
| 个人简历 | 第109页 |
