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高产β-甘露聚糖酶菌株选育、构建及其酶学特性研究
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高产β-甘露聚糖酶菌株选育、构建及其酶学特性研究
论文目录
 
摘要第1-6页
Abstract第6-16页
1 绪论第16-31页
　　· 石油压裂液第16-17页
　　　　· 压裂液的主要作用和基本要求第16页
　　　　· 压裂液的种类第16-17页
　　· 压裂液添加剂第17-20页
　　　　· 增稠剂第18页
　　　　· 破胶剂第18-20页
　　　　· 其他添加剂第20页
　　· β-甘露聚糖酶研究进展第20-29页
　　　　· β-甘露聚糖酶概况第20-21页
　　　　· β-甘露聚糖酶的来源和性质第21-23页
　　　　· β-甘露聚糖酶的分子结构第23-24页
　　　　· β-甘露聚糖酶的作用方式和水解产物第24-25页
　　　　· β-甘露聚糖酶产生菌的诱变育种第25-27页
　　　　· β-甘露聚糖酶的分子生物学研究第27-28页
　　　　· β-甘露聚糖酶的分离纯化第28页
　　　　· β-甘露聚糖酶的应用第28-29页
　　· 本课题研究的目的和意义第29-30页
　　· 本课题研究的主要内容和创新点第30-31页
2 降解瓜尔胶菌株的筛选和鉴定第31-41页
　　· 实验材料和仪器第31-33页
　　　　· 材料第31页
　　　　· 主要试剂第31页
　　　　· 主要仪器第31-32页
　　　　· 主要试剂的配制第32页
　　　　· 主要培养基第32-33页
　　· 实验方法第33-36页
　　　　· 菌株的筛选方法第33-34页
　　　　· 菌株生理生化特性研究第34-35页
　　　　· 菌株16s rDNA鉴定第35-36页
　　· 结果与分析第36-38页
　　　　· 甘露糖标准曲线第36页
　　　　· 产甘露聚糖酶菌株的筛选第36-37页
　　　　· 菌株的形态及生理生化特性第37-38页
　　　　· 菌株的分子鉴定第38页
　　· 讨论第38-40页
　　· 本章小结第40-41页
3 瓜尔胶和魔芋胶降解菌的诱变育种第41-57页
　　· 实验材料第41页
　　　　· 出发菌株第41页
　　　　· 主要试剂第41页
　　　　· 主要培养基第41页
　　　　· 主要仪器第41页
　　· 实验方法第41-45页
　　　　· 出发菌株生长曲线的测定第41-42页
　　　　· 出发菌株产酶历程的测定第42页
　　　　· 菌株的紫外诱变第42-44页
　　　　· 菌株的甲基磺酸乙酯诱变第44页
　　　　· 菌株的~(60)Co诱变第44-45页
　　· 结果与分析第45-54页
　　　　· 出发菌株的生长曲线第45-47页
　　　　· 出发菌株的产酶历程第47-48页
　　　　· 紫外诱变结果和遗传稳定性第48-50页
　　　　· 甲基磺酸乙酯诱变结果和遗传稳定性第50-53页
　　　　· ~(60)Co诱变结果和遗传稳定性第53-54页
　　· 讨论第54-55页
　　· 本章小结第55-57页
4 B.subtilis WLY-12的Man基因的克隆与表达第57-70页
　　· 实验材料第57页
　　　　· 菌株第57页
　　　　· 主要试剂第57页
　　　　· 主要仪器第57页
　　　　· 主要试剂配制和培养基第57页
　　· 实验方法第57-63页
　　　　· B.subtilis Man基因的克隆第57-59页
　　　　· pPIC9K/Man重组表达载体的构建及鉴定第59-61页
　　　　· 转化 Pichia pastoris GS115第61-62页
　　　　· 重组酵母菌甘露聚糖酶的诱导表达第62页
　　　　· 丙酮沉淀蛋白第62页
　　　　· 表达产物SDS-PAGE检测第62-63页
　　· 结果与分析第63-67页
　　　　· PCR扩增保守序列第63页
　　　　· PCR扩增Man基因序列第63-64页
　　　　· 重组质粒pMD18-T/Man的构建及鉴定第64-65页
　　　　· pPIC9K/Man重组表达载体的构建及鉴定第65-66页
　　　　· 重组质粒pPIC9K/Man的线性化第66页
　　　　· 直接PCR鉴定重组子第66-67页
　　　　· 重组蛋白的SDS-PAGE电泳第67页
　　· 讨论第67-69页
　　· 本章小结第69-70页
5 重组β-甘露聚糖酶的分离纯化和酶学特性的研究第70-85页
　　· 实验材料第70页
　　　　· 菌株第70页
　　　　· 主要试剂第70页
　　　　· 主要仪器第70页
　　　　· 主要试剂配制第70页
　　· 实验方法第70-74页
　　　　· 粗酶液的制备第70页
　　　　· 甘露聚糖酶活性的测定第70-71页
　　　　· 蛋白含量测定第71页
　　　　· 硫酸铵盐析第71页
　　　　· 透析脱盐第71-72页
　　　　· 聚乙二醇浓缩第72页
　　　　· DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析第72页
　　　　· 超滤管浓缩第72-73页
　　　　· Sephadex G-75凝胶过滤第73页
　　　　· 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)第73页
　　　　· 肽段序列的飞行时间质谱分析(MALDI-TOF-MS)第73页
　　　　· 重组甘露聚糖酶的酶学特性第73-74页
　　· 结果与分析第74-82页
　　　　· 蛋白质标准曲线第74页
　　　　· 硫酸铵盐析饱和度第74-75页
　　　　· DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析的缓冲液pH值的确定第75页
　　　　· 目的蛋白的分离纯化第75-76页
　　　　· SDS-PAGE电泳第76页
　　　　· 飞行质谱结果第76-77页
　　　　· 酶的最适pH值和pH值稳定性实验第77-79页
　　　　· 酶的最适温度和热稳定性性实验第79-80页
　　　　· 金属离子、EDTA和SDS对酶活性的影响第80-81页
　　　　· 盐浓度对酶活性的影响第81-82页
　　　　· 米氏常数及最大反应速率的测定第82页
　　· 讨论第82-83页
　　· 本章小结第83-85页
结论第85-87页
参考文献第87-99页
附录第99-102页
攻读学位期间发表的学术论文第102-103页
致谢第103-104 页

本篇论文共104页，点击这进入下载页面。
 
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