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奶牛隐孢子虫分离株基于DNA特征的种类鉴定及单克隆抗体制备
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奶牛隐孢子虫分离株基于DNA特征的种类鉴定及单克隆抗体制备
论文目录
 
致谢第1-8 页
中文摘要第8-9 页
文献综述第9-20 页
　　1 牛隐孢子虫分类第9-11 页
　　　　· C.parvum第9-10 页
　　　　· C.bovis第10-11 页
　　　　· C.andersoni第11 页
　　2 内生发育史第11-12 页
　　3 细胞免疫和体液免疫第12-13 页
　　4 流行病学特点第13-14 页
　　5 诊断第14-19 页
　　　　· 粪便学诊断第14-15 页
　　　　　　· 漂浮法第14-15 页
　　　　　　· 染色法第15 页
　　　　· 免疫学诊断第15-17 页
　　　　　　· 酶联免疫吸附实验(ELISA)第15-16 页
　　　　　　· 免疫荧光法(IFA)第16 页
　　　　　　· 单克隆抗体(McAb)技术第16 页
　　　　　　· 流式细胞技术(FC)第16-17 页
　　　　· 分子生物学诊断第17-19 页
　　　　　　· 常规PCR第17 页
　　　　　　· 巢式PCR(Nested-PCR)第17-18 页
　　　　　　· 反转录PCR(RT-PCR)第18 页
　　　　　　· 免疫磁性捕获PCR法(IC-PCR)第18 页
　　　　　　· ELISA-PCR第18 页
　　　　　　· 随机引物多态性DNA-PCR(RAPD-PCR)第18-19 页
　　　　　　· 聚合酶链式反应一限制性长度多态性(PCR-RFLP)第19 页
　　6 防治第19-20 页
第一部分 某奶牛场隐孢子虫流行病学调查及动物感染试验第20-27 页
　　引言第20 页
　　1 材料与方法第20-22 页
　　　　· 粪样采集第20 页
　　　　· 隐孢子虫卵囊检查第20-21 页
　　　　· 动物感染试验第21-22 页
　　2 结果第22-25 页
　　　　· 卵囊形态结构第22-23 页
　　　　· 奶牛隐孢子虫感染情况第23 页
　　　　· 感染强度第23-24 页
　　　　· 动物感染试验结果第24-25 页
　　3 分析与讨论第25-27 页
　　　　· 奶牛隐孢子虫感染率第25 页
　　　　· 隐孢子虫感染率与奶牛年龄的关系第25 页
　　　　· 奶牛隐孢子虫种类与感染年龄关系第25-26 页
　　　　· C.andersoni可能存在着亚群第26 页
　　　　· C.andersoni具有潜在公共卫生意义第26-27 页
第二部分 PCR-RFLP鉴定奶牛隐孢子虫分离株种类第27-35 页
　　引言第27 页
　　1 材料与方法第27-30 页
　　　　· 材料第27 页
　　　　　　· 试验用卵囊第27 页
　　　　　　· 试剂第27 页
　　　　　　· 主要仪器和实验室耗材第27 页
　　　　· 方法第27-30 页
　　　　　　· 隐孢子虫卵囊的纯化第28 页
　　　　　　· DNA提取第28-29 页
　　　　　　· PCR扩增第29 页
　　　　　　· PCR产物的检测第29 页
　　　　　　· PCR-RFLP分析第29-30 页
　　　　　　· PCR产物测序第30 页
　　　　　　· 种系发育分析第30 页
　　2 结果第30-33 页
　　　　· PCR扩增结果第30-31 页
　　　　· PCR-RFLP结果第31-32 页
　　　　· 18SrDNA序列种系发育分析第32-33 页
　　3 分析与讨论第33-35 页
第三部分 抗牛源隐孢子虫单克隆抗体的研制第35-50 页
　　引言第35 页
　　1 材料与方法第35-43 页
　　　　· 主要试剂第35 页
　　　　· 试剂配制第35-37 页
　　　　· 耗材及主要仪器第37-38 页
　　　　· 细胞第38 页
　　　　· 实验动物第38 页
　　　　· 方法第38-43 页
　　　　　　· 隐孢子虫卵囊提纯第38 页
　　　　　　· 免疫用卵囊抗原的制备第38-39 页
　　　　　　· Balb/c鼠免疫程序第39 页
　　　　　　· 筛选方法的建立第39-40 页
　　　　　　· 杂交瘤细胞株的建立第40-42 页
　　　　　　· 单克隆抗体的鉴定第42-43 页
　　2 结果第43-47 页
　　　　· 隐孢子虫颗粒性免疫原的制备第43 页
　　　　· 检测抗隐孢子虫抗体间接ELISA方法的建立第43-45 页
　　　　　　· 抗原抗体最佳稀释度的选择结果第43 页
　　　　　　· 抗原最佳包被条件的测定结果第43 页
　　　　　　· 酶标二抗最佳工作浓度的确定第43 页
　　　　　　· 封闭剂、血清、酶标二抗最佳作用时间的测定结果第43-44 页
　　　　　　· 免疫鼠血清效价检测结果第44-45 页
　　　　· 杂交瘤细胞株的建立第45-46 页
　　　　· 单抗的鉴定第46-47 页
　　　　　　· 杂交瘤细胞培养上清效价的测定第46 页
　　　　　　· 腹水中单抗效价的测定第46 页
　　　　　　· 单抗的稳定性测定第46 页
　　　　　　· 免疫荧光法对单抗的抗原定位第46-47 页
　　3 分析与讨论第47-50 页
　　　　· 卵囊的纯化第47 页
　　　　· 隐孢子虫的免疫原性第47-48 页
　　　　· 影响细胞融合的原因第48-49 页
　　　　· 免疫学诊断方法的建立第49-50 页
参考文献第50-58 页
ABSTRACT第58-59页

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