C-8，7甾醇异构酶基因的克隆表达及功能研究 |
论文目录 | | | 致谢 | 第1-11
页 | | 中文摘要 | 第11-12
页 | | 第一章 文献综述 | 第12-21
页 | | · 甾醇的结构及药用功能 | 第12-13
页 | | · 植物甾醇的分类 | 第13
页 | | · 植物甾醇与抗氧化性 | 第13-14
页 | | · 植物甾醇与心血管系统 | 第14-16
页 | | · 植物甾醇与植物衰老 | 第16
页 | | · 植物甾醇的提取方法 | 第16-18
页 | | · 混合植物甾醇提取方法 | 第17
页 | | · 植物甾醇精制及单体分离方法 | 第17-18
页 | | · 溶剂结晶法 | 第18
页 | | · 分子蒸馏技术 | 第18
页 | | · 植物甾醇与基因工程 | 第18-19
页 | | · 植物甾醇合成关键酶基因的调控 | 第19-21
页 | | 第二章 大麦C-8,7甾醇异构酶基因克隆及其表达分析 | 第21-29
页 | | 1 材料与方法 | 第21-25
页 | | · 实验材料 | 第21
页 | | · 植物材料 | 第21
页 | | · 主要试剂和材料 | 第21
页 | | · 大麦种子发芽 | 第21
页 | | · 大麦幼苗总RNA的提取及cDNA第一条链的合成 | 第21-22
页 | | · 大麦种子RNA的提取 | 第21-22
页 | | · RNA的纯度检测 | 第22
页 | | · cDNA第一条链的合成 | 第22
页 | | · 大麦C-8,7甾醇异构酶基因的cDNA克隆 | 第22-24
页 | | · 基因片断PCR扩增 | 第22
页 | | · PCR扩增产物的检测与回收纯化 | 第22-23
页 | | · 回收产物与pBS-T载体的连接 | 第23
页 | | · 重组载体对大肠杆菌的转化 | 第23-24
页 | | · 感受态细胞的制备(Ca-Mn法): | 第23
页 | | · DNA的热击转化 | 第23-24
页 | | · 重组质粒的鉴定 | 第24
页 | | · 碱裂解法小量提取质粒 | 第24
页 | | · 重组质粒的PCR鉴定 | 第24
页 | | · 序列的测定 | 第24
页 | | · 定量RT-PCR分析 | 第24-25
页 | | 2 结果分析 | 第25-28
页 | | · 大麦C-8,7甾醇异构酶基因克隆及序列分析 | 第25-27
页 | | · 大麦幼芽总RNA的提取 | 第25
页 | | · 大麦C-8,7甾醇异构酶基因的cDNA克隆及序列分析 | 第25-27
页 | | · C-8,7甾醇异构酶基因的表达特性分析 | 第27-28
页 | | · 大麦HvSI1的时空表达特性 | 第27-28
页 | | · 大麦HvSI在衰老组织中的表达特性 | 第28
页 | | 3 讨论 | 第28-29
页 | | 第三章 大麦C-8,7甾醇异构酶基因体外表达及活性分析 | 第29-36
页 | | 1 材料与方法 | 第29-32
页 | | · 菌株、载体及试剂 | 第29
页 | | · 原核生物培养基的配制 | 第29
页 | | · HvSI基因体外表达载体构建 | 第29-30
页 | | · PCR扩增和产物的回收 | 第29
页 | | · PCR产物和原核表达载体PGEX-4T的酶切 | 第29-30
页 | | · PGEX-4T表达载体的连接 | 第30
页 | | · 感受态细胞的制备与转化 | 第30
页 | | · 重组质粒的鉴定 | 第30
页 | | · 表达载体PGEX-4T-HvSI1及PGEX-4T-HvSI2转化表达菌株BL21 | 第30
页 | | · SDS-PAGE电泳细胞总蛋白检测分析 | 第30-32
页 | | · SDS-PAGE电泳所需试剂的配制 | 第30-31
页 | | · 细胞总蛋白质的电泳检测和分析 | 第31-32
页 | | 2 结果分析 | 第32-34
页 | | · 原核表达载体的构建及验证 | 第32-33
页 | | · 原核表达产物的SDS-PAGE电泳结果分析 | 第33-34
页 | | 3 讨论 | 第34-36
页 | | 第四章 大麦C-8,7甾醇异构酶基因的功能研究 | 第36-48
页 | | 1 材料与方法 | 第36-39
页 | | · 受体材料 | 第36
页 | | · 载体、菌株和试剂 | 第36
页 | | · 水稻培养基的配制 | 第36-37
页 | | · HvSI基因植物转化载体的构建 | 第37
页 | | · 根癌农杆菌介导法遗传转化水稻 | 第37-38
页 | | · 根癌农杆菌感受态细胞的制备转化 | 第37
页 | | · 种子的消毒和愈伤组织的诱导 | 第37
页 | | · 农杆菌介导水稻转化 | 第37-38
页 | | · 转基因植株的初步鉴定 | 第38
页 | | · 转基因水稻总DNA的提取 | 第38
页 | | · 转基因植株的PCR鉴定 | 第38
页 | | · 转基因水稻外源目的基因转录水平表达检测 | 第38-39
页 | | 2 结果分析 | 第39-45
页 | | · 真核表达载体的构建 | 第39-42
页 | | · 真核表达载体pUbi::HvSI1的构建 | 第39
页 | | · 真核表达载体pUbi::HvSI-RNAi的构建 | 第39-40
页 | | · 真核表达载体pubi::HvSI-GFP的构建 | 第40-41
页 | | · 真核表达载体pGluB7::HvSI的构建 | 第41-42
页 | | · C-8,7甾醇异构酶基因对水稻遗传转化的研究 | 第42-45
页 | | · 水稻胚性愈伤的获得 | 第42-43
页 | | · 抗性愈伤组织筛选及植株再生 | 第43
页 | | · 转基因植株的PCR鉴定 | 第43-44
页 | | · 过量表达转基因水稻不同部位表达特性分析 | 第44-45
页 | | 3 讨论 | 第45-48
页 | | 第五章 全文小结 | 第48-50
页 | | · 大麦C-8,7甾醇异构酶基因的克隆及其结构特点、表达特性 | 第48
页 | | · C-8,7甾醇异构酶体外表达载体的构建和重组蛋白的获得 | 第48
页 | | · 四种植物转化载体的构建 | 第48
页 | | · 外源目的基因多种表达形式的转基因水稻植株的获得 | 第48-49
页 | | · 展望 | 第49-50
页 | | 参考文献 | 第50-53
页 | | 英文摘要 | 第53-54页 |
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