论文目录 | |
| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 一. 文献综述 | 第12-23页 |
| · 猪圆环病毒概述 | 第12页 |
| · PCV的病原学特征 | 第12-13页 |
| · PCV的基因组结构 | 第13-14页 |
| · PCV基因组的转录 | 第14-15页 |
| · 基因组编码的主要功能蛋白 | 第15-17页 |
| · Cap蛋白 | 第15页 |
| · Rep蛋白 | 第15-17页 |
| · Rep蛋白的结构研究进展 | 第17-18页 |
| · Rep和Rep'参与的病毒复制过程 | 第18-20页 |
| · Rep与宿主蛋白的相互作用 | 第20-21页 |
| · 其他病毒Rep蛋白研究进展 | 第21-23页 |
| · 双粒病毒Rep蛋白研究进展 | 第21-22页 |
| · 腺相关病毒Rep蛋白研究进展 | 第22-23页 |
| 二. 研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 三. 材料与方法 | 第24-40页 |
| · 实验材料 | 第24-27页 |
| · 质粒、菌株 | 第24页 |
| · 主要试剂 | 第24页 |
| · 引物设计 | 第24-25页 |
| · 荧光底物 | 第25页 |
| · 主要培养基及相关溶液 | 第25页 |
| · 缓冲液 | 第25-27页 |
| · 实验方法 | 第27-40页 |
| · 目的基因的扩增 | 第27-28页 |
| · 表达质粒的构建与鉴定 | 第28-31页 |
| · 重组菌的表达与鉴定 | 第31-34页 |
| · Rep蛋白的ATPase活性测定 | 第34-36页 |
| · SUMO-Rep蛋白非特异性ssDNA及dsDNA结合活性的检测 | 第36页 |
| · SUMO-Rep蛋白的解旋活性测定 | 第36-39页 |
| · SUMO-Rep蛋白K180A突变体的活性研究 | 第39-40页 |
| 四. 实验结果与分析 | 第40-58页 |
| · PCV2rep基因的扩增 | 第40页 |
| · 重组原核表达载体pET-28a SUMO-rep的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| · Rep蛋白原核表达以及纯化条件的摸索 | 第41-43页 |
| · Western-blot | 第43页 |
| · 对照蛋白SUMO的表达纯化 | 第43-44页 |
| · SUMO-REP蛋白ATPase活性研究 | 第44-47页 |
| · SUMO-Rep蛋白浓度对ATP水解反应的影响 | 第44-45页 |
| · ATP水解反应与时间的关系 | 第45页 |
| · 二价金属离子对SUMO-Rep ATPase活性的影响 | 第45-46页 |
| · 核酸对SUMO-Rep ATPase活性的影响 | 第46-47页 |
| · SUMO-Rep蛋白的核酸结合活性研究 | 第47-49页 |
| · SUMO-Rep与ssDNA结合活性的检测 | 第47-48页 |
| · SUMO-Rep与3’突出dsDNA及5’突出dsDNA结合活性的检测 | 第48-49页 |
| · SUMO-REP蛋白解旋酶活性研究 | 第49-54页 |
| · SUMO-Rep解旋方向的判定 | 第49-50页 |
| · 解旋反应时间曲线 | 第50页 |
| · 蛋白浓度及底物浓度对解旋速率的影响 | 第50-51页 |
| · 二价金属离子对SUMO-Rep解旋反应的影响 | 第51-52页 |
| · ATP对解旋反应的影响 | 第52-53页 |
| · 温度对解旋活性的影响 | 第53页 |
| · 捕获链对解旋反应的影响 | 第53-54页 |
| · 解旋酶Km及Vmax的测定 | 第54页 |
| · SUMO-Rep ATPase关键活性位点研究 | 第54-58页 |
| · 突变基因的扩增 | 第54-55页 |
| · 突变蛋白SUMO-Rep K180A的表达与纯化 | 第55-56页 |
| · SUMO-RepK180A突变蛋白ATPase活性的检测 | 第56-57页 |
| · SUMO-RepK180A突变蛋白解旋解旋活性的检测 | 第57-58页 |
| 五. 讨论与结论 | 第58-61页 |
| · 讨论 | 第58-60页 |
| · 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 致谢 | 第68
页 |
