论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第9-19页 |
| 1.1 引言 | 第9页 |
| 1.2 5’-肌苷酸的应用 | 第9-11页 |
| 1.2.1 5’-肌苷酸在食品工业上的应用 | 第9-10页 |
| 1.2.2 5’-肌苷酸在饲料工业上的应用 | 第10页 |
| 1.2.3 5’-肌苷酸在医药及保健品行业上的应用 | 第10-11页 |
| 1.3 5’-肌苷酸的生产方法 | 第11-13页 |
| 1.3.1 化学合成法 | 第11页 |
| 1.3.2 水解法 | 第11-12页 |
| 1.3.3 微生物发酵法 | 第12页 |
| 1.3.4 生物催化法 | 第12-13页 |
| 1.4 5’-肌苷酸国内外市场分析及工业生产概况 | 第13页 |
| 1.4.1 5’-肌苷酸国内外市场分析 | 第13页 |
| 1.4.2 5’-肌苷酸工业生产概况 | 第13页 |
| 1.5 5’-肌苷酸的检测方法 | 第13-14页 |
| 1.6 酸性磷酸酶简介 | 第14-15页 |
| 1.7 表达外源蛋白工程菌发酵过程优化 | 第15-16页 |
| 1.8 5’-肌苷酸生产菌株的育种策略与育种实例 | 第16-17页 |
| 1.8.1 微生物发酵法育种策略 | 第16页 |
| 1.8.2 基于生物催化理论的育种策略 | 第16-17页 |
| 1.8.3 肌苷酸生产菌的育种实例 | 第17页 |
| 1.9 论文的立题背景和研究内容 | 第17-19页 |
| 1.9.1 立题背景 | 第17-18页 |
| 1.9.2 本论文的主要研究内容 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第19-20页 |
| 2.2 主要仪器和试剂 | 第20-26页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第21-23页 |
| 2.2.3 主要溶液 | 第23-24页 |
| 2.2.4 培养基 | 第24-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-37页 |
| 2.3.1 质粒提取 | 第26-27页 |
| 2.3.2 DNA限制性内切酶酶切 | 第27页 |
| 2.3.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第27页 |
| 2.3.4 DNA的回收纯化 | 第27-28页 |
| 2.3.5 连接与转化 | 第28-29页 |
| 2.3.6 感受态细胞制备 | 第29-30页 |
| 2.3.7 PCR扩增 | 第30-32页 |
| 2.3.8 转化子鉴定 | 第32页 |
| 2.3.9 目的基因测序 | 第32页 |
| 2.3.10 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第32-33页 |
| 2.3.11 酶学性质的分析测定 | 第33-35页 |
| 2.3.12 培养方法 | 第35-37页 |
| 3 结果与讨论 | 第37-64页 |
| 3.1 酸性磷酸酶AP/PTase基因序列的优化 | 第37-38页 |
| 3.2 表达酸性磷酸酶大肠杆菌重组菌的构建 | 第38-41页 |
| 3.2.1 重组质粒pQE30-phoCY和pQE30-phoCY~M的构建 | 第38-40页 |
| 3.2.2 重组酸性磷酸酶表达与鉴定 | 第40-41页 |
| 3.3 酶学性质的研究 | 第41-43页 |
| 3.3.1 最适反应温度和热稳定性分析测定 | 第41页 |
| 3.3.2 最适反应pH及pH稳定性的分析测定 | 第41-42页 |
| 3.3.3 酶促动力学参数测定 | 第42-43页 |
| 3.4 以重组菌细胞为酶源生成5’-肌苷酸催化效率对比 | 第43-44页 |
| 3.5 金属离子及表面活性剂对AP/PTase~M的影响 | 第44-46页 |
| 3.6 小结与讨论 | 第46页 |
| 3.7 大肠杆菌重组菌XL1-Blue+pQE30-phoCY~M发酵工艺研究 | 第46-52页 |
| 3.7.1 诱导时机对产酶的影响 | 第46-48页 |
| 3.7.2 诱导温度对产酶的影响 | 第48-50页 |
| 3.7.3 诱导时长对产酶的影响 | 第50-51页 |
| 3.7.4 最适底物浓度的优化 | 第51-52页 |
| 3.8 小结与讨论 | 第52页 |
| 3.9 表达酸性磷酸酶枯草芽孢杆菌重组菌的构建 | 第52-61页 |
| 3.9.1 基因工程菌构建思路 | 第52页 |
| 3.9.2 目的片段的PCR获得 | 第52-53页 |
| 3.9.3 重组质粒pBE43-phoCYA~M的构建 | 第53-55页 |
| 3.9.4 重组质粒pBSA43-phoCY~M的构建 | 第55-56页 |
| 3.9.5 重组质粒pBE43-phoCY~M和pBSA43-phoCYC~M电转化B.subtilis JG | 第56-58页 |
| 3.9.6 重组菌B.ubtilis JG(pBE43-phoCYA~M/pSA43-phoCYC~M)蛋白电泳分析 | 第58页 |
| 3.9.7 B.subtilis二步法生产5’-肌苷酸 | 第58-61页 |
| 3.10 E coli-B.subtilis二步法发酵生产5’-肌苷酸 | 第61-63页 |
| 3.10.1 研究背景与思路 | 第61-62页 |
| 3.10.2 发酵液处理方式对5’-肌苷酸产量的影响 | 第62页 |
| 3.10.3 E. coli-B.subtilis二步法生产5’-肌苷酸催化条件的优化 | 第62-63页 |
| 3.11 小结与讨论 | 第63-64页 |
| 4 结论 | 第64-65页 |
| 5 展望 | 第65-66页 |
| 6 参考文献 | 第66-72页 |
| 7 研究生期间发表论文情况 | 第72-73页 |
| 8 致谢 | 第73页 |
