论文目录 | |
| 摘要 | 第1-8
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| Abstract | 第8-10
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| 缩略语表(Abbreviation) | 第10-11
页 |
| 1 文献综述 | 第11-18
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| · 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS) | 第11-14
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| · 猪繁殖与呼吸综合征及其病原特征 | 第11
页 |
| · PRRSV的基因组结构与蛋白质 | 第11-13
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| · PRRS的流行病学特点 | 第13
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| · PRRSV的免疫学反应 | 第13
页 |
| · PRRS疫苗研究进展 | 第13-14
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| · 甲病毒复制子 | 第14-15
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| · 甲病毒的基因组结构 | 第14
页 |
| · "自主复制型"RNA疫苗 | 第14-15
页 |
| · "自杀性"DNA疫苗 | 第15
页 |
| · 杆状病毒表达系统 | 第15-18
页 |
| · 杆状病毒的生物学特点 | 第15-16
页 |
| · 杆状病毒表达系统 | 第16-17
页 |
| · 杆状病毒作为哺乳动物细胞表达载体在疫苗研究中的应用 | 第17-18
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| 2 研究的目的与意义 | 第18-19
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| 3 材料与方法 | 第19-30
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| · 试验材料 | 第19-21
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| · 毒株、细胞与菌株 | 第19
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| · 载体与质粒 | 第19
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| · 工具酶及主要试剂 | 第19-20
页 |
| · 培养基、抗生素的配制 | 第20
页 |
| · 免疫反应试验所用抗原及血清 | 第20
页 |
| · 主要缓冲液及相关试剂的配制 | 第20-21
页 |
| · 试验动物 | 第21
页 |
| · 试验方法 | 第21-30
页 |
| · 限制性酶切反应 | 第21
页 |
| · PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第21
页 |
| · 线性质粒DNA末端去磷酸化 | 第21-22
页 |
| · PCR产物或酶切产物回收与纯化 | 第22
页 |
| · 外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第22
页 |
| · 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第22-23
页 |
| · 连接产物的转化 | 第23
页 |
| · 质粒的制备与鉴定 | 第23-24
页 |
| · 重组杆状病毒构建的操作流程及示意图 | 第24
页 |
| · 重组穿梭载体(Bacmid)的构建 | 第24-25
页 |
| · 重组穿梭载体(Bacmid)的提取 | 第25
页 |
| · 重组Bacmid转染Sf9细胞(脂质体介导的转染法) | 第25
页 |
| · 重组杆状病毒的获得 | 第25-26
页 |
| · 重组杆状病毒转导BHK细胞 | 第26
页 |
| · Western blot检测目的蛋白在真核细胞中的表达 | 第26-27
页 |
| · GP5-ELISA试验及PRRSV全病毒ELISA试验 | 第27
页 |
| · 微量中和试验(固定病毒-稀释血清法) | 第27-28
页 |
| · 细胞免疫的检测 | 第28-29
页 |
| · 动物试验 | 第29
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| · 统计学方法 | 第29-30
页 |
| 4 结果与分析 | 第30-42
页 |
| · 穿梭质粒的构建 | 第30-33
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| · 中间质粒pSCA1-CMV/SFV-ORF3/4/5/6的构建 | 第30-32
页 |
| · 穿梭质粒pFastBac-VSV/G-CMV/SFV-ORF3/4/5/6的构建 | 第32-33
页 |
| · 重组Bacmid-G-CMV/SFV-ORF3/4/5/6的构建 | 第33-34
页 |
| · 重组杆状病毒的获得 | 第34-35
页 |
| · 重组杆状病毒毒价的测定 | 第35
页 |
| · Western blot检测目的蛋白在真核细胞中的表达 | 第35-36
页 |
| · 重组杆状病毒在小鼠体内的免疫效率检测 | 第36-42
页 |
| · 免疫小鼠的ELISA抗体水平 | 第37-38
页 |
| · 特异性抗猪繁殖与呼吸综合征病毒中和抗体检测 | 第38-40
页 |
| · 免疫小鼠脾淋巴细胞分泌的IFN-γ水平检测 | 第40
页 |
| · 荧光定量PCR方法分析免疫小鼠脾淋巴细胞IFN-γ的mRNA水平 | 第40-42
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| 5 讨论与结论 | 第42-44
页 |
| · 讨论 | 第42-43
页 |
| · PRRS的保护性抗原基因 | 第42
页 |
| · 杆状病毒载体及甲病毒复制子 | 第42-43
页 |
| · 结论 | 第43-44
页 |
| 参考文献 | 第44-49
页 |
| 致谢 | 第49
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