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基于自溶素锚定的芽胞杆菌体内与体外活性展示系统的研究
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基于自溶素锚定的芽胞杆菌体内与体外活性展示系统的研究
论文目录
 
摘要第1-10页
ABSTRACT第10-12页
缩略语表第12-13页
1 前言第13-31页
　　· 细菌表面展示技术与应用进展第13-17页
　　　　· 表面展示技术的简介第13页
　　　　· 细菌表面展示体系的组成第13-15页
　　　　　　· 运载蛋白第13-14页
　　　　　　· 靶蛋白第14页
　　　　　　· 宿主菌第14-15页
　　　　· 细菌表面展示技术的应用第15-17页
　　　　　　· 疫苗开发第15页
　　　　　　· 多肽文库的筛选第15-16页
　　　　　　· 全细胞催化剂第16页
　　　　　　· 生物吸附剂及降解剂第16-17页
　　　　· 表面展示技术的问题及展望第17页
　　· 细菌自溶素第17-23页
　　　　· 自溶素概述第17-18页
　　　　· 自溶素分类第18-22页
　　　　　　· N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酸-酰胺酶第19-20页
　　　　　　· 肽链内切酶和羧肽酶第20页
　　　　　　· N-乙酰胞壁酸第20-22页
　　　　　　· N-乙酰葡萄糖胺酶第22页
　　　　· 细菌生活周期中的自溶素第22-23页
　　· LysM模体第23-26页
　　　　· LysM结构域概述第23页
　　　　· LysM的结构第23-24页
　　　　· 含有LysM模体的多种功能蛋白第24-25页
　　　　　　· 肽聚糖水解酶第24-25页
　　　　　　· 噬菌体细胞溶解酶第25页
　　　　　　· 其它蛋白第25页
　　　　· LysM模体的发展第25-26页
　　· 漆酶的研究进展第26-29页
　　　　· 漆酶概述第26页
　　　　· 漆酶的性质第26-28页
　　　　　　· 漆酶的理化性质第26-27页
　　　　　　· 漆酶的结构及催化活性中心第27页
　　　　　　· 漆酶催化的底物ABTS第27-28页
　　　　　　· 漆酶活性的增强与抑制第28页
　　　　· 漆酶的应用第28-29页
　　　　　　· 食品行业的应用第28页
　　　　　　· 在工业废水处理中的应用第28-29页
　　　　　　· 在其它方面的应用第29页
　　· 研究目的及意义第29-31页
2 材料与方法第31-41页
　　· 实验材料第31-36页
　　　　· 菌株第31-32页
　　　　· 质粒第32-33页
　　　　· PCR引物第33页
　　　　· 培养基第33-34页
　　　　· 试剂第34-36页
　　　　　　· 抽提质粒和总DNA、制备感受态第34页
　　　　　　· 酶切、酶连、PCR和DNA回收第34页
　　　　　　· 琼脂糖凝胶电泳、SDS-PAGE及Western blot第34-35页
　　　　　　· 显微镜观察及流式细胞仪分析所用试剂第35页
　　　　　　· SDS及Pronase敏感性分析试剂第35页
　　　　　　· 大肠杆菌表达、纯化所需试剂第35页
　　　　　　· 漆酶活性测定试剂第35-36页
　　　　　　· 其它缓冲液及试剂第36页
　　　　· 主要仪器第36页
　　· 实验方法第36-41页
　　　　· 常规分子生物学操作技术第36-37页
　　　　　　· 大肠杆菌和苏云金芽胞杆菌质粒DNA抽提第36页
　　　　　　· 苏云金芽胞杆菌总DNA的抽提第36-37页
　　　　　　· DNA电泳分析及回收第37页
　　　　　　· 酶连与大肠杆菌的CaCl_2法转化第37页
　　　　· PCR扩增第37页
　　　　· 苏云金芽胞杆菌的电转化第37-38页
　　　　· 绿色荧光蛋白荧光强度检测第38页
　　　　· 生长曲线及荧光活性曲线绘制第38页
　　　　· 苏云金芽胞杆菌细胞成分的分级分离第38页
　　　　· SDS-PAGE及Western Blot分析第38-39页
　　　　　　· SDS-PAGE分析第38页
　　　　　　· Western blot分析第38-39页
　　　　· 相差及荧光显微镜观察第39页
　　　　· 流式细胞仪分析第39页
　　　　· 大肠杆菌诱导表达、亲和纯化第39-40页
　　　　　　· 大肠杆菌诱导表达第39页
　　　　　　· 亲和纯化第39-40页
　　　　· 漆酶酶活性的测定第40页
　　　　· 相对荧光定量第40-41页
3 结果与分析第41-61页
　　· mbg基因表达分析第41-43页
　　　　· mbg在苏云金芽胞杆菌不同菌种中的扩增第41-42页
　　　　· mbg坛基因在细菌不同生长时期的转录活性第42-43页
　　· Mbgn-GFP表面展示体系构建及分析第43-47页
　　　　· Mbgn-GFP表面展示体系构建第43页
　　　　· 生长曲线及荧光强度曲线绘制第43-45页
　　　　· 荧光显微镜及免疫荧光显微镜观察第45-46页
　　　　· 流式细胞仪分析第46-47页
　　· Mbgn-GFP融合蛋白的纯化与体外锚定第47-51页
　　　　· 融合蛋白在大肠杆菌中的表达第47-49页
　　　　· Mbgn-GFP对不同菌株的体外锚定能力分析第49-51页
　　· Mbgn-WlacD表而展示体系构建第51-55页
　　　　· Mbgn-WlacD表面展示体系构建第51页
　　　　· 重组菌漆酶活性测定第51-52页
　　　　· 生长曲线及酶活曲线的绘制第52-54页
　　　　· 免疫荧光显微镜观察第54页
　　　　· 流式细胞仪分析第54-55页
　　· Mbgn-WlacD融合蛋白的表达第55-58页
　　　　· 融合蛋白表达载体的构建与诱导第55-57页
　　　　· 融合蛋白体外锚定能力分析第57-58页
　　· Mbg蛋白的纯化第58-61页
　　　　· Mbg纯化载体的构建第58-59页
　　　　· Mbg蛋白的诱导第59-61页
4. 讨论第61-66页
　　· Mbg的功能分析第61-62页
　　· Mbg的锚定能力分析第62-64页
　　4.4. 小结第64-66页
参考文献第66-73页
致谢第73-74页
附录第74 页

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