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农杆菌介导的双价抗虫基因Pta-CrylAc番茄的遗传转化研究
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农杆菌介导的双价抗虫基因Pta-CrylAc番茄的遗传转化研究
论文目录
 
摘要第1-8页
Abstract第8-9页
第一章 前言第9-20页
　　1 植物抗虫基因工程研究进展第9-13页
　　　　· 来源于微生物的抗虫基因第9-10页
　　　　· 来源于高等植物的抗虫基因第10-12页
　　　　· 来源于动物的抗虫基因第12-13页
　　2 提高外源抗虫基因在植物体内的表达第13-14页
　　　　· 对非必需区段进行缺失处理第13页
　　　　· 基因改造第13页
　　　　· 利用定位信号提高基因表达第13页
　　　　· 利用基质结合区提高基因表达第13-14页
　　　　· 叶绿体转化第14页
　　　　· 改进T I质粒第14页
　　3 植物抗虫基因工程存在的主要问题及解决措施第14-16页
　　　　· 抗虫基因的基因沉默第14-15页
　　　　· 抗虫转基因工程中昆虫的抗性问题第15-16页
　　　　· 转抗虫基因植物潜在的生态风险性第16页
　　4 植物转化与番茄基因改良第16-20页
　　　　· 植物转化第16-18页
　　　　· 番茄遗传转化与品种改良的研究进展第18-20页
第二章 材料和方法第20-39页
　　1.实验材料第20-22页
　　　　· 植物材料第20页
　　　　· 质粒和菌种第20页
　　　　· 试剂盒、酶类及抗体第20页
　　　　· PCR引物第20-21页
　　　　· 培养基第21-22页
　　　　· 植物激素、抗生素及其他化学试剂：第22页
　　　　· 实验器具及其他：第22页
　　2 实验方法第22-39页
　　　　· 植物表达双价抗虫载体pCAMBIA3300-PTA-CRYLA的构建第22-28页
　　　　· 番茄的组织培养第28-32页
　　　　· 转化番茄的鉴定与分析第32-33页
　　　　· 转化番茄植株的分子生物学检测第33-37页
　　　　· 转化番茄的除草剂抗性检测第37-38页
　　　　· 转化番茄的遗传学分析第38-39页
第三章 结果与分析第39-56页
　　1 重组质粒的载体构建第39-40页
　　　　· APALⅠ单酶切鉴定重组质粒P3300-BT第39页
　　　　· 重组质粒及XHOⅠ和KPNⅠ双酶切鉴定重组质粒图谱第39-40页
　　2 番茄转化的优化体系的建立第40-49页
　　　　· 外植体的选择第40-41页
　　　　· 外植体最适生长条件的优化第41-43页
　　　　· 农杆菌侵染条件的优化第43-47页
　　　　· 共培养时间对转化率的影响第47-48页
　　　　· 选择剂选择浓度对转化率的影响第48页
　　　　· 抑菌素的选择及用量对转化率的影响第48-49页
　　　　· 转化后番茄的再生率第49页
　　3 转化植株组织化学及分子生物学检测第49-52页
　　　　· CRYIAC基因的GUS组织化学分析第49-50页
　　　　· CRYIAC基因的PCR检测第50-51页
　　　　· CRYIAC基因的RT-PCR检测第51页
　　　　· CRYIAC基因的SOUTHERN杂交检测第51-52页
　　4 转基因番茄的除草剂抗性检测第52-53页
　　5 转化番茄的遗传学检测第53-54页
　　　　· TL代植株的CRYIAC基因的分离第54页
　　　　· 双价抗虫基因在TL代的分离第54页
　　6 TL代转基因植株的抗虫鉴定第54-56页
第四章 结论与讨论第56-59页
　　1 双价抗虫载体的构建第56页
　　2 番茄转化系统的优化第56-57页
　　　　· 影响番茄再生的主要因素第56-57页
　　　　· 影响农杆菌介导番茄转化的主要因素第57页
　　3 转基因番茄的遗传分离第57-58页
　　4 抗虫鉴定第58页
　　5 转抗虫基因蔬菜的安全性评价第58-59页
参考文献第59-63页
附录第63-64页
致谢第64 页

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