朵丽蝶兰生物钟相关基因DhLHY的克隆与功能验证



朵丽蝶兰生物钟相关基因DhLHY的克隆与功能验证

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朵丽蝶兰生物钟相关基因DhLHY的克隆与功能验证

论文目录
摘要	第1-5页
ABSTRACT	第5-6页
目录	第6-9页
前言	第9-10页
第一章文献综述	第10-19页
· 生物钟的研究意义	第10页
· 生物钟节律基因调控过程	第10-15页
· 昼夜节律信号输入途径	第11-12页
· 生物钟中央振荡器	第12-14页
· 昼夜节律钟信号输出	第14-15页
· MYB 转录因子	第15-17页
· LHY/CCA1 研究进展	第17-18页
· 研究的目的和意义	第18-19页
第二章克隆获得 DHLHY 基因 CDNA 序列全长	第19-41页
· 蝴蝶兰 LHY 基因相关序列获得	第19-20页
· 材料	第20-21页
· 实验材料	第20-21页
· 实验试剂	第21页
· 仪器设备及实验器材	第21页
· 实验方法	第21-28页
· Trizol 法提取总 RNA	第21-22页
· 消化 DNA	第22-23页
· 引物设计	第23页
· 克隆获得 cDNA 全长序列	第23-27页
· DhLHY 基因序列生物信息学分析	第27-28页
· 结果与分析	第28-40页
· 叶片总 RNA 的提取	第28页
· DNA 消化结果	第28-29页
· RT‐PCR 结果	第29-30页
· 基因序列鉴定	第30页
· cDNA 序列分析	第30-31页
· 功能结构域分析	第31-32页
· 同源基因氨基酸序列分析	第32-35页
· 进化树的构建	第35-37页
· DhLHY 基因编码蛋白预测及分析	第37-40页
· 讨论	第40-41页
第三章 DHLHY 基因的时空表达	第41-51页
· 试验材料	第41页
· 植物材料	第41页
· 主要试剂	第41页
· 仪器设备	第41页
· 试验方法	第41-45页
· 材料处理	第41页
· 材料取样	第41-42页
· 提取总 RNA	第42页
· 引物设计	第42-43页
· 内参设计	第43页
· DNA 消化与 cDNA 合成	第43-44页
· 各组织 cDNA 模版与特异性引物验证	第44页
· 实时定量 RT‐PCR	第44-45页
· 结果与分析	第45-50页
· 各组织 cDNA 模版与特异性引物的验证	第45-46页
· DhLHY 基因表达分析	第46-50页
· 讨论	第50-51页
第四章农杆菌介导法转化拟南芥	第51-69页
· 材料	第51页
· 试验材料	第51页
· 主要试剂	第51页
· 主要试验仪器设备	第51页
· 方法	第51-60页
· 提取总 RNA	第51页
· cDNA 的合成	第51-52页
· ORF 特异性引物设计	第52-53页
· ORF 扩增	第53页
· PCR 产物回收	第53页
· 目的片段回收产物与载体连接	第53-54页
· 连接产物转化大肠杆菌及阳性克隆的筛选	第54页
· 阳性克隆 PCR 菌检与测序	第54页
· 提取质粒	第54-55页
· 载体酶切	第55-57页
· 酶切产物胶回收	第57页
· 酶切目的产物连接	第57-58页
· 连接产物转化大肠杆菌及阳性克隆的筛选	第58页
· 表达载体的第一轮酶切验证	第58页
· 热击法农杆菌感受态的制备	第58-59页
· 载体质粒转化农杆菌及阳性克隆的筛选	第59页
· 提取农杆菌菌液质粒	第59页
· 载体质粒转化大肠杆菌及阳性克隆筛选	第59-60页
· 表达载体的第二轮酶切验证	第60页
· 拟南芥种植与侵染	第60-62页
· 拟南芥种植与处理	第60页
· 转化介质的配制	第60页
· 扩大培养农杆菌菌液	第60-61页
· 浸花法侵染拟南芥	第61页
· 转基因拟南芥纯合子植株的筛选	第61-62页
· 转基因植株鉴定	第62-63页
· 转基因植株提取 DNA	第62页
· PCR 检测阳性植株	第62-63页
· 转基因植株表型观察	第63页
· 结果与分析	第63-68页
· ORF 区 PCR 扩增结果	第63页
· 中间载体酶切结果	第63-64页
· 表达载体酶切验证结果	第64-66页
· 转基因植株 PCR 检测	第66-67页
· 转基因植株表型分析	第67-68页
· 讨论	第68-69页
第五章结论与展望	第69-71页
· 研究结论	第69页
· 研究展望	第69-71页
参考文献	第71-79页
附录	第79-81页
个人简介	第81-82页
致谢	第82页

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