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植酸酶appA基因的克隆、表达及酶学性质分析
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植酸酶appA基因的克隆、表达及酶学性质分析
论文目录
 
摘要第1-7页
Abstract第7-12页
第一章 文献综述第12-26页
　　· 植酸酶第13页
　　· 植酸酶的来源第13-15页
　　　　· 植物来源的植酸酶第13-14页
　　　　· 动物来源的植酸酶第14-15页
　　　　· 微生物来源的植酸酶第15页
　　· 植酸酶的作用机理第15-16页
　　· 植酸酶的酶学性质第16-18页
　　　　· 分子量第16页
　　　　· 最适pH值第16页
　　　　· 最适温度第16-17页
　　　　· 热稳定性第17-18页
　　　　· 其它性质第18页
　　· 植酸酶活性的测定方法第18-19页
　　　　· 硫酸亚铁-钼蓝法第19页
　　　　· 丙酮-磷钼酸铵法第19页
　　　　· 维生素C-钼蓝法第19页
　　　　· 钒-钼酸铵法第19页
　　· 植酸酶的应用第19-21页
　　　　· 植酸酶在饲料工业中的应用第19-20页
　　　　· 植酸酶在食品工业中的应用第20-21页
　　　　· 植酸酶在医药领域的应用第21页
　　　　· 在农业生产应用上第21页
　　· 植酸酶基因工程的研究进展第21-23页
　　　　· 微生物高效表达植酸酶基因第22页
　　　　· 植酸酶基因在植物中表达第22页
　　　　· 植酸酶热稳定性研究第22-23页
　　· appA植酸酶研究进展第23-26页
第二章 引言第26-28页
　　· 研究目的及意义第26页
　　· 研究的主要内容第26页
　　· 研究路线第26-28页
第三章 高活性植酸酶appA菌株的筛选及基因克隆第28-42页
　　· 材料第28-30页
　　　　· 菌株与质粒第28页
　　　　· PCR引物第28页
　　　　· 药品、酶及试剂盒第28-29页
　　　　· 主要生化试剂和溶液第29页
　　　　· 植酸酶活性测定溶液第29-30页
　　　　· 主要仪器第30页
　　· 方法第30-35页
　　　　· 高活性植酸酶appA菌株的筛选第30-31页
　　　　· 植酸酶appA基因的克隆第31-35页
　　　　· 植酸酶appA基因序列分析第35页
　　· 结果与分析第35-40页
　　　　· 高活性植酸酶appA菌株的筛选第35-36页
　　　　· 大肠杆菌基因组的获得第36页
　　　　· 目的基因PCR产物第36-37页
　　　　· 阳性重组子的筛选第37页
　　　　· 植酸酶appA目的基因测序第37-39页
　　　　· 植酸酶appA基因序列分析第39-40页
　　· 讨论第40-41页
　　· 小结第41-42页
第四章 植酸酶appA基因在毕赤酵母中表达第42-58页
　　· 材料第42-44页
　　　　· 菌种与质粒第42页
　　　　· 酶与试剂盒及主要试剂第42-43页
　　　　· 培养基第43页
　　　　· 主要试剂及常用溶液第43-44页
　　　　· 主要仪器第44页
　　· 方法第44-50页
　　　　· 阳性克隆质粒DNA提取第44-45页
　　　　· 目的基因和pPIC9K空表达载体双酶切第45页
　　　　· 目的基因与表达载体连接第45页
　　　　· 转化第45-46页
　　　　· 碱裂解法提取重组质粒DNA第46页
　　　　· 表达载体pPIC9K-appA线性化第46-47页
　　　　· 毕赤酵母GS115感受态细胞制备第47页
　　　　· 线性化载体电转化毕赤酵母GS115第47页
　　　　· 阳性重组子继代培养第47-48页
　　　　· PCR法筛选转化子第48页
　　　　· 阳性重组子酶活性鉴定第48-49页
　　　　· 植酸酶appA阳性重组子(His~+)毕赤酵母诱导表达第49页
　　　　· 诱导表达蛋白样品处理第49页
　　　　· SDS-PAGE凝胶的制备、加样及电泳第49-50页
　　　　· 凝胶染色与脱色第50页
　　· 结果与分析第50-55页
　　　　· 阳性T克隆质粒提取第50-51页
　　　　· EcoR Ⅰ和Not Ⅰ 双酶切鉴定第51-52页
　　　　· pPIC9k酵母表达构建第52-53页
　　　　· 表达重组子的转化及筛选鉴定第53-54页
　　　　· 基因工程菌植酸酶诱导表达第54-55页
　　· 讨论第55-56页
　　　　· 酵母表达系统第55-56页
　　　　· 外源蛋白在毕赤酵母中表达第56页
　　· 小结第56-58页
第五章 重组植酸酶表达蛋白纯化及酶学性质分析第58-66页
　　· 材料第58-60页
　　　　· 药品及试剂第58页
　　　　· 不同pH值缓冲液第58-59页
　　　　· 酶活性测定试剂第59页
　　　　· 主要仪器第59-60页
　　· 方法第60-61页
　　　　· 重组植酸酶appA表达蛋白纯化第60页
　　　　· 纯化植酸酶SDS-PAGE分析第60页
　　　　· 植酸酶appA表达蛋白溶液定量分析第60-61页
　　　　· 植酸酶酶学性质研究第61页
　　· 结果与分析第61-64页
　　　　· 表达产物的纯化和SDS-PAGE检测第61-62页
　　　　· 重组植酸酶定量分析第62-63页
　　　　· 重组植酸酶最适pH测定第63页
　　　　· 重组植酸酶最适温度测定第63-64页
　　　　· 重组植酸酶热稳定性测定第64页
　　· 结论第64-65页
　　　　· 重组植酸酶的纯化第64-65页
　　　　· 重组植酸酶的性质第65页
　　· 小结第65-66页
第六章 总结及下一步研究进展第66-68页
参考文献第68-76页
在校期间发表的论文第76-78页
致谢第78页

本篇论文共78页，点击这进入下载页面。
 
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