植酸酶appA基因的克隆、表达及酶学性质分析
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植酸酶appA基因的克隆、表达及酶学性质分析
论文目录
摘要
第1-7页
Abstract
第7-12页
第一章 文献综述
第12-26页
· 植酸酶
第13页
· 植酸酶的来源
第13-15页
· 植物来源的植酸酶
第13-14页
· 动物来源的植酸酶
第14-15页
· 微生物来源的植酸酶
第15页
· 植酸酶的作用机理
第15-16页
· 植酸酶的酶学性质
第16-18页
· 分子量
第16页
· 最适pH值
第16页
· 最适温度
第16-17页
· 热稳定性
第17-18页
· 其它性质
第18页
· 植酸酶活性的测定方法
第18-19页
· 硫酸亚铁-钼蓝法
第19页
· 丙酮-磷钼酸铵法
第19页
· 维生素C-钼蓝法
第19页
· 钒-钼酸铵法
第19页
· 植酸酶的应用
第19-21页
· 植酸酶在饲料工业中的应用
第19-20页
· 植酸酶在食品工业中的应用
第20-21页
· 植酸酶在医药领域的应用
第21页
· 在农业生产应用上
第21页
· 植酸酶基因工程的研究进展
第21-23页
· 微生物高效表达植酸酶基因
第22页
· 植酸酶基因在植物中表达
第22页
· 植酸酶热稳定性研究
第22-23页
· appA植酸酶研究进展
第23-26页
第二章 引言
第26-28页
· 研究目的及意义
第26页
· 研究的主要内容
第26页
· 研究路线
第26-28页
第三章 高活性植酸酶appA菌株的筛选及基因克隆
第28-42页
· 材料
第28-30页
· 菌株与质粒
第28页
· PCR引物
第28页
· 药品、酶及试剂盒
第28-29页
· 主要生化试剂和溶液
第29页
· 植酸酶活性测定溶液
第29-30页
· 主要仪器
第30页
· 方法
第30-35页
· 高活性植酸酶appA菌株的筛选
第30-31页
· 植酸酶appA基因的克隆
第31-35页
· 植酸酶appA基因序列分析
第35页
· 结果与分析
第35-40页
· 高活性植酸酶appA菌株的筛选
第35-36页
· 大肠杆菌基因组的获得
第36页
· 目的基因PCR产物
第36-37页
· 阳性重组子的筛选
第37页
· 植酸酶appA目的基因测序
第37-39页
· 植酸酶appA基因序列分析
第39-40页
· 讨论
第40-41页
· 小结
第41-42页
第四章 植酸酶appA基因在毕赤酵母中表达
第42-58页
· 材料
第42-44页
· 菌种与质粒
第42页
· 酶与试剂盒及主要试剂
第42-43页
· 培养基
第43页
· 主要试剂及常用溶液
第43-44页
· 主要仪器
第44页
· 方法
第44-50页
· 阳性克隆质粒DNA提取
第44-45页
· 目的基因和pPIC9K空表达载体双酶切
第45页
· 目的基因与表达载体连接
第45页
· 转化
第45-46页
· 碱裂解法提取重组质粒DNA
第46页
· 表达载体pPIC9K-appA线性化
第46-47页
· 毕赤酵母GS115感受态细胞制备
第47页
· 线性化载体电转化毕赤酵母GS115
第47页
· 阳性重组子继代培养
第47-48页
· PCR法筛选转化子
第48页
· 阳性重组子酶活性鉴定
第48-49页
· 植酸酶appA阳性重组子(His~+)毕赤酵母诱导表达
第49页
· 诱导表达蛋白样品处理
第49页
· SDS-PAGE凝胶的制备、加样及电泳
第49-50页
· 凝胶染色与脱色
第50页
· 结果与分析
第50-55页
· 阳性T克隆质粒提取
第50-51页
· EcoR Ⅰ和Not Ⅰ 双酶切鉴定
第51-52页
· pPIC9k酵母表达构建
第52-53页
· 表达重组子的转化及筛选鉴定
第53-54页
· 基因工程菌植酸酶诱导表达
第54-55页
· 讨论
第55-56页
· 酵母表达系统
第55-56页
· 外源蛋白在毕赤酵母中表达
第56页
· 小结
第56-58页
第五章 重组植酸酶表达蛋白纯化及酶学性质分析
第58-66页
· 材料
第58-60页
· 药品及试剂
第58页
· 不同pH值缓冲液
第58-59页
· 酶活性测定试剂
第59页
· 主要仪器
第59-60页
· 方法
第60-61页
· 重组植酸酶appA表达蛋白纯化
第60页
· 纯化植酸酶SDS-PAGE分析
第60页
· 植酸酶appA表达蛋白溶液定量分析
第60-61页
· 植酸酶酶学性质研究
第61页
· 结果与分析
第61-64页
· 表达产物的纯化和SDS-PAGE检测
第61-62页
· 重组植酸酶定量分析
第62-63页
· 重组植酸酶最适pH测定
第63页
· 重组植酸酶最适温度测定
第63-64页
· 重组植酸酶热稳定性测定
第64页
· 结论
第64-65页
· 重组植酸酶的纯化
第64-65页
· 重组植酸酶的性质
第65页
· 小结
第65-66页
第六章 总结及下一步研究进展
第66-68页
参考文献
第68-76页
在校期间发表的论文
第76-78页
致谢
第78页
本篇论文共
78
页,
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