论文目录 | |
| 摘要 | 第1-4页 |
| abstract | 第4-10页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第10-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-19页 |
| 1.1 前言 | 第12-13页 |
| 1.2 磁性纳米粒子在食源性致病菌检测中的应用 | 第13-14页 |
| 1.2.1 基于磁性纳米粒子光学属性的检测方法 | 第13页 |
| 1.2.2 基于磁性纳米粒子磁性属性的检测方法 | 第13-14页 |
| 1.2.3 基于磁性纳米粒子过氧化物模拟酶活性的检测方法 | 第14页 |
| 1.3 基于磁纳米粒子磁富集分离技术提高食源性致病菌检测灵敏度的方法 | 第14-18页 |
| 1.3.1 联合灵敏的检测方法 | 第16页 |
| 1.3.2 增大食品样品检测体系 | 第16-17页 |
| 1.3.3 开发新颖的检测标志物 | 第17-18页 |
| 1.4 研究的意义和内容 | 第18-19页 |
| 1.4.1 研究背景 | 第18页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第18-19页 |
| 第二章 生物素放大暴露的单增李斯特菌磁分离方法的建立 | 第19-43页 |
| 2.1 前言 | 第19-21页 |
| 2.2 试剂与材料 | 第21-22页 |
| 2.2.1 主要实验试剂与材料 | 第21页 |
| 2.2.2 主要实验仪器设备 | 第21页 |
| 2.2.3 主要实验试剂的配制方案 | 第21-22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-28页 |
| 2.3.1 菌株的培养 | 第22页 |
| 2.3.1.1 划线培养 | 第22页 |
| 2.3.1.2 试管培养 | 第22页 |
| 2.3.2 生物素化抗体的制备 | 第22页 |
| 2.3.3 聚酰胺-胺树状分子介导的生物素化抗体的制备 | 第22-23页 |
| 2.3.4 链霉亲和素包被的磁性纳米粒子的偶联 | 第23-24页 |
| 2.3.5 生物素暴露的磁富集方法富集分离单增李斯特菌 | 第24-28页 |
| 2.3.5.1 生物素化抗体的表征 | 第24页 |
| 2.3.5.2 生物素化抗体用量的优化 | 第24-25页 |
| 2.3.5.3 生物素化抗体与单增李斯特菌免疫反应时间的优化 | 第25页 |
| 2.3.5.4 MNP-SA与生物素化抗体标记的单增李斯特菌孵育时间的优化 | 第25-26页 |
| 2.3.5.5 MNP-SA用量的优化 | 第26页 |
| 2.3.5.6 磁富集分离时间的优化 | 第26-27页 |
| 2.3.5.7 PBS中不同浓度单增李斯特菌的富集分离效率 | 第27页 |
| 2.3.5.8 生菜加标样品中不同浓度的单增李斯特菌的富集分离 | 第27-28页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第28-43页 |
| 2.4.1 生物素暴露的磁富集分离方法富集分离单增李斯特菌的研究 | 第28-35页 |
| 2.4.1.1 MNP-SA的表征 | 第28-29页 |
| 2.4.1.2 biotin-mAb的表征 | 第29-30页 |
| 2.4.1.3 biotin-mAb用量的优化 | 第30-31页 |
| 2.4.1.4 biotin-mAb与单增李斯特菌免疫反应时间的优化 | 第31-32页 |
| 2.4.1.5 MNP-SA用量的优化 | 第32页 |
| 2.4.1.6 MNP-SA与biotin-mAb标记的单增李斯特菌孵育时间的优化 | 第32-33页 |
| 2.4.1.7 磁富集分离时间的优化 | 第33-34页 |
| 2.4.1.8 PBS 和生菜样品中和生菜样品中单增李斯特菌的富集分离 | 第34页 |
| 2.4.1.9 小结 | 第34-35页 |
| 2.4.2 基于PAMAM介导的生物素放大暴露的磁富集分离方法分离单增李斯特菌的研究 | 第35-43页 |
| 2.4.2.1 biotin-PAMAM-mAb的表征 | 第35-36页 |
| 2.4.2.2 biotin-PAMAM-mAb与单增李斯特菌免疫反应时间的优化 | 第36-37页 |
| 2.4.2.3 biotin-PAMAM-mAb用量的优化 | 第37页 |
| 2.4.2.4 MNP-SA与biotin-PAMAM-mAb标记的单增李斯特菌孵育时间的优化 | 第37-38页 |
| 2.4.2.5 MNP-SA用量的优化 | 第38-39页 |
| 2.4.2.6 磁分离时间的优化 | 第39页 |
| 2.4.2.7 PBS和生菜样品中单增李斯特菌磁富集分离 | 第39-40页 |
| 2.4.2.8 不同biotin暴露量对单增李斯特菌分离效率的影响 | 第40-41页 |
| 2.4.2.9 小结 | 第41-43页 |
| 第三章 单增李斯特菌活菌的检测方法研究 | 第43-64页 |
| 3.1 联合PMA-aPCR技术和核酸层析试纸条检测单增李斯特菌活菌 | 第43-55页 |
| 3.1.1 前言 | 第43-44页 |
| 3.1.2 试剂与材料 | 第44页 |
| 3.1.2.1 主要实验试剂与材料 | 第44页 |
| 3.1.2.2 主要实验仪器设备 | 第44页 |
| 3.1.2.3 主要实验试剂配制方案 | 第44页 |
| 3.1.3 实验方法 | 第44-47页 |
| 3.1.3.1 引物和探针的设计 | 第44-45页 |
| 3.1.3.2 aPCR的扩增体系及条件 | 第45页 |
| 3.1.3.3 PMA处理对死菌aPCR扩增的影响 | 第45-46页 |
| 3.1.3.4 生菜加标样品中单增李斯特菌的富集分离 | 第46页 |
| 3.1.3.5 生菜加标样品中单增李斯特菌活菌的检测 | 第46页 |
| 3.1.3.6 核酸层析试纸条的制备及组装 | 第46-47页 |
| 3.1.4 结果与讨论 | 第47-54页 |
| 3.1.4.1 引物特异性的验证 | 第47-48页 |
| 3.1.4.2 引物退火温度的优化 | 第48-49页 |
| 3.1.4.3 AuNP与AuNP-Probe的表征 | 第49页 |
| 3.1.4.4 aPCR引物浓度的优化 | 第49-52页 |
| 3.1.4.5 PMA处理对死菌aPCR的影响 | 第52-53页 |
| 3.1.4.6 PBS和生菜加标样品中单增李斯特菌活菌的检测 | 第53页 |
| 3.1.4.7 特异性检测 | 第53-54页 |
| 3.1.5 小结 | 第54-55页 |
| 3.2 联合PMA-PCR技术和流式细胞术检测单增李斯特菌活菌的研究 | 第55-64页 |
| 3.2.1 前言 | 第55-56页 |
| 3.2.2 试剂与材料 | 第56页 |
| 3.2.2.1 主要实验试剂与材料 | 第56页 |
| 3.2.2.2 主要实验仪器设备 | 第56页 |
| 3.2.2.3 主要实验试剂的配制方案 | 第56页 |
| 3.2.3 实验方法 | 第56-57页 |
| 3.2.3.1 引物的设计 | 第56页 |
| 3.2.3.2 PCR的扩增体系及条件 | 第56-57页 |
| 3.2.3.3 PMA处理对死菌PCR扩增的影响 | 第57页 |
| 3.2.3.4 生菜加标样品中单增李斯特菌的富集分离 | 第57页 |
| 3.2.3.5 生菜加标样品中单增李斯特活菌的检测 | 第57页 |
| 3.2.3.6 流式细胞仪检测 | 第57页 |
| 3.2.4 实验结果 | 第57-62页 |
| 3.2.4.1 引物特异性验证 | 第57-58页 |
| 3.2.4.2 退火温度的优化 | 第58-59页 |
| 3.2.4.3 引物浓度的优化 | 第59页 |
| 3.2.4.4 PMA处理对死菌PCR的影响 | 第59-60页 |
| 3.2.4.5 PBS和生菜加标样品中单增李斯特菌活菌的检测 | 第60-62页 |
| 3.2.4.6 特异性检测 | 第62页 |
| 3.2.5 小结 | 第62-64页 |
| 第四章 结论与展望 | 第64-67页 |
| 4.1 结论 | 第64-65页 |
| 4.2 展望 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 附录A1 实验试剂与材料 | 第75-77页 |
| 附录A2 实验仪器设备 | 第77-79页 |
| 附录A3 常用试剂配置方案 | 第79-80页 |
| 个人简介 | 第80页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第80页 |
