论文目录 | |
| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 缩略词 (Abbreviation) | 第13-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-37页 |
| 1.1 纤维素概述 | 第15-17页 |
| 1.1.1 纤维素的产生及结构 | 第15-17页 |
| 1.1.2 纤维素的降解 | 第17页 |
| 1.2 里氏木霉纤维素酶的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.2.1 里氏木霉纤维素酶系统的组成 | 第17-18页 |
| 1.2.2 纤维素酶分子的结构和功能 | 第18-19页 |
| 1.3 里氏木霉纤维素酶基因诱导表达机制假设 | 第19-20页 |
| 1.4 细胞内能量变化-碳代谢抑制及其调控 | 第20-21页 |
| 1.5 真核细胞能量感受器-AMPK | 第21-24页 |
| 1.5.1 AMPK的组成和结构 | 第21-23页 |
| 1.5.2 AMPK级联反应：细胞内能量的开关 | 第23-24页 |
| 1.6 真菌碳代谢抑制调控的关键蛋白AMPK | 第24-28页 |
| 1.6.1 酵母AMPK/Snf1的发现 | 第25-26页 |
| 1.6.2 Snf1复合物的组成和活性调控 | 第26页 |
| 1.6.3 Snf1复合物各亚基的功能 | 第26-28页 |
| 1.6.4 Snf1复合物的Snf1/α亚基活性与其他亚基的关系 | 第28页 |
| 1.7 AMPK/Snf1在酵母代谢调控中的功能 | 第28-34页 |
| 1.7.1 Snf1在葡糖糖阻遏(CCR)中的作用 | 第29-30页 |
| 1.7.2 Snf1在葡糖糖信号感应中的作用 | 第30-31页 |
| 1.7.3 Snf1在转录水平对细胞代谢的影响 | 第31-33页 |
| 1.7.4 Snf1在转录后水平对细胞代谢的影响 | 第33-34页 |
| 1.8 丝状真菌能量感应过程和AMPK的研究进展 | 第34-35页 |
| 1.9 立题依据及研究内容 | 第35-37页 |
| 第二章 里氏木霉AMP-激活的蛋白激酶编码基因cnrk1的鉴定 | 第37-52页 |
| 2.1 材料与方法 | 第37-44页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第37-38页 |
| 2.1.2 引物 | 第38-39页 |
| 2.1.3 主要试剂及仪器 | 第39-40页 |
| 2.1.4 培养条件 | 第40-42页 |
| 2.1.5 常规分子生物学方法 | 第42-44页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第44-51页 |
| 2.2.1 里氏木霉中cnrk1基因的鉴定和蛋白结构域比对分析 | 第44-46页 |
| 2.2.2 酵母AMPK在里氏木霉中的回补 | 第46-47页 |
| 2.2.3 里氏木霉Cnrk1在酵母中的回补 | 第47-49页 |
| 2.2.4 里氏木S Cnrkl-N端与爵母AMPK-C端融合片段在掉母AMPK缺失菌MCY4908中的回补 | 第49-51页 |
| 2.3 小结 | 第51-52页 |
| 第三章 里氏木霉AMPK/Cnrk1缺失菌的构建和性状分析 | 第52-72页 |
| 3.1 材料与方法 | 第52-63页 |
| 3.1.1 菌种和质粒 | 第52-53页 |
| 3.1.2 引物 | 第53页 |
| 3.1.3 主要试剂及仪器 | 第53页 |
| 3.1.4 序列比对 | 第53-54页 |
| 3.1.5 培养基和培养条件 | 第54页 |
| 3.1.6 常规分子生物学方法 | 第54-57页 |
| 3.1.7 遗传操作 | 第57-58页 |
| 3.1.8 突变株鉴定 | 第58-63页 |
| 3.1.9 平板生长检测 | 第63页 |
| 3.1.10 发酵液蛋白浓度测定 | 第63页 |
| 3.1.11 外切葡聚糖(pNPC)酶活力测定方法 | 第63页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第63-71页 |
| 3.2.1 里氏木霉中cnrk1基因缺失突变株的构建及验证 | 第63-66页 |
| 3.2.2 里氏木霉△cnrk1突变株的生长表型测定 | 第66-67页 |
| 3.2.3 里氏木霉Cnrk1的缺失对细胞壁完整性的影响 | 第67-69页 |
| 3.2.4 里氏木霉Cnrk1的缺失对孢子存活的影响 | 第69-70页 |
| 3.2.5 Cnrk1的缺失对里氏木霉纤维素酶产生的影响 | 第70-71页 |
| 3.3 小结 | 第71-72页 |
| 第四章 Tricoderma reesei Cnrk1活性突变株的构建及性质研究 | 第72-91页 |
| 4.1 材料与方法 | 第72-80页 |
| 4.1.1 菌种和质粒 | 第72-73页 |
| 4.1.2 引物 | 第73-74页 |
| 4.1.3 主要试剂及仪器 | 第74-75页 |
| 4.1.4 生物信息学分析 | 第75页 |
| 4.1.5 培养条件 | 第75页 |
| 4.1.6 常规分子生物学方法 | 第75-80页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第80-90页 |
| 4.2.1 里氏木霉Cnrk1与酵母AMPK氨基酸活性位点比对分析 | 第80页 |
| 4.2.2 里氏木霉中Cnrk1活性突变株的构建及验证 | 第80-82页 |
| 4.2.3 里氏木霉Cnrk1活性突变株对不同碳源的利用 | 第82-83页 |
| 4.2.4 里氏木霉Cnrk1活性突变对纤维素酶产生的影响 | 第83-84页 |
| 4.2.5 里氏木霉Cnrk1G18R突变对纤维素酶产生的影响 | 第84-88页 |
| 4.2.6 里氏木霉Cnrk1G18R/T175A双突变对纤维素酶产生的影响 | 第88-89页 |
| 4.2.7 △cnrk1诱导动力学分析 | 第89-90页 |
| 4.3 小结 | 第90-91页 |
| 第五章 酵母双杂交体系筛选与Cnrk1相互作用蛋白 | 第91-101页 |
| 5.1 材料与方法 | 第92-97页 |
| 5.1.1 菌种和质粒 | 第92页 |
| 5.1.2 引物 | 第92-93页 |
| 5.1.3 主要试剂及仪器 | 第93页 |
| 5.1.4 培养条件 | 第93-94页 |
| 5.1.5 常规分子生物学方法 | 第94-97页 |
| 5.2 结果与讨论 | 第97-100页 |
| 5.2.1 Bait重组质粒pGBKT7-Cnrk1构建与鉴定 | 第97页 |
| 5.2.2 重组诱饵质粒pGBKT7-Cnrk1在Y2HGold中的表达和鉴定 | 第97页 |
| 5.2.3 pGBKT7-Cnrk1 bait菌株毒性及自激活检测 | 第97-98页 |
| 5.2.4 文库质粒在bait菌种的大规模转化 | 第98页 |
| 5.2.5 转化子的筛选 | 第98-99页 |
| 5.2.6 转化子的鉴定 | 第99页 |
| 5.2.7 阳性克隆测序结果分析 | 第99-100页 |
| 5.3 小结 | 第100-101页 |
| 全文总结 | 第101-103页 |
| 参考文献 | 第103-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 附件 | 第110页 |
