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黑曲霉纤维二糖酶基因在酵母细胞中的表达
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黑曲霉纤维二糖酶基因在酵母细胞中的表达
论文目录
 
致谢第1-5页
目录第5-9页
摘要第9-11页
Abstract第11-13页
第一章 文献综述第13-33页
　　· 概述第13页
　　· 纤维素酶第13-18页
　　　　· 纤维素酶的组成第14页
　　　　· 纤维素酶协同作用机制第14-16页
　　　　· 纤维素酶的来源第16-17页
　　　　· 里氏木霉纤维素酶第17-18页
　　· 纤维二糖酶第18-23页
　　　　· 黑曲霉纤维二糖酶第18-20页
　　　　　　· 黑曲霉纤维二糖酶的性质第18-19页
　　　　　　· 黑曲霉纤维二糖酶的作用底物第19页
　　　　　　· 纤维二糖酶的作用机制第19页
　　　　　　· 纤维二糖酶活性中心结构第19-20页
　　　　　　· 纤维二糖酶的抑制和激活第20页
　　　　· 纤维二糖酶的应用第20-23页
　　　　　　· 在食品领域中的的应用第20-22页
　　　　　　· 在医药领域中的应用第22-23页
　　　　　　· 纤维二糖酶的其他应用第23页
　　· 纤维二糖酶在酵母系统中的异源表达第23-30页
　　　　· 酿酒酵母表达系统第24-25页
　　　　· 纤维素酶基因在酿酒酵母中的表达第25-26页
　　　　· 毕赤酵母表达系统第26-30页
　　　　　　· 影响毕赤酵母表达的因素第27-30页
　　　　· 纤维素酶基因在毕赤酵母中的表达第30页
　　· 本课题思路第30-33页
第二章 黑曲霉纤维二糖酶基因在工业酿酒酵母中的表达第33-55页
　　引言第33页
　　· 材料与方法第33-45页
　　　　· 菌株和质粒第33-34页
　　　　· 试剂第34-35页
　　　　· 培养基第35页
　　　　· 实验方法第35-45页
　　　　　　· PCR反应第35-36页
　　　　　　· 酶切与连接第36-38页
　　　　　　· T质粒载体连接第38页
　　　　　　· 质粒载体的构建第38-41页
　　　　　　· 质粒的线性化第41页
　　　　　　· 大肠杆菌的转化第41-42页
　　　　　　· 酿酒酵母电转化第42-43页
　　　　　　· 遗传酶素抗性的验证第43页
　　　　　　· 酵母发酵产酒精策略第43页
　　　　　　· 发酵液成分测定第43页
　　　　　　· SDS-PAGE第43-44页
　　　　　　· 蛋白浓缩第44-45页
　　　　　　· 纤维二糖酶(CB)活力的测定第45页
　　· 结果与讨论第45-53页
　　　　· PYXK212的构建第45-46页
　　　　· PYXK212T的构建第46-47页
　　　　· PYXK212T-αbgl的构建第47-48页
　　　　· PYXK212TI-αbgl的构建第48-49页
　　　　· 酿酒酵母电转化及转化子筛选第49-50页
　　　　· 酿酒酵母转化子的PCR验证第50页
　　　　· 转化子酒精发酵实验第50-51页
　　　　· SDS-PAGE验证及酶活分析第51-53页
　　结论第53-55页
第三章 黑曲霉纤维二糖酶基因在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达第55-69页
　　引言第55页
　　· 材料与方法第55-62页
　　　　· 菌株与质粒第55页
　　　　· 试剂第55-56页
　　　　· 培养基第56-57页
　　　　· 实验方法第57-62页
　　　　　　· PCR反应第57页
　　　　　　· 酶切与连接第57-58页
　　　　　　· T质粒载体连接第58页
　　　　　　· 质粒的线性化第58页
　　　　　　· 质粒载体的构建第58-59页
　　　　　　· 大肠杆菌的转化第59-60页
　　　　　　· 毕赤酵母的转化第60页
　　　　　　· 毕赤酵母高拷贝转化子的筛选第60页
　　　　　　· 毕赤酵母基因组的提取第60-61页
　　　　　　· 毕赤酵母转化子的验证第61页
　　　　　　· 外源蛋白表达策略第61页
　　　　　　· SDS-PAGE第61页
　　　　　　· 纤维二糖酶(CB)活力的测定第61-62页
　　　　　　· 重组酶最适温度和最适pH的测定第62页
　　· 结果与讨论第62-68页
　　　　· pPIC9K-bgl的构建第62-63页
　　　　· 毕赤酵母的转化及重组子的筛选第63-64页
　　　　· 高拷贝转化子NPP1的PCR验证第64-65页
　　　　· NPP1表达黑曲霉bgl基因的验证及SDS-PAGE第65页
　　　　· NPP1产酶时间进程第65-67页
　　　　· 重组酶最适温度和最适pH第67-68页
　　结论第68-69页
第四章 重组毕赤酵母发酵产纤维二糖酶的研究第69-81页
　　· 材料与方法第69-71页
　　　　· 菌种第69页
　　　　· 试剂第69-70页
　　　　· 培养基第70页
　　　　· 实验方法第70-71页
　　　　　　· 两步法发酵产酶实验第70页
　　　　　　· 一步法发酵产酶实验第70-71页
　　　　　　· 菌落计数第71页
　　　　　　· 纤维二糖酶(CB)活力的测定第71页
　　· 结果与讨论第71-80页
　　　　· 两步法发酵条件优化第71-75页
　　　　　　· 诱导前菌体浓度的影响第71-72页
　　　　　　· 甲醇浓度的影响第72-73页
　　　　　　· pH的影响第73-74页
　　　　　　· 两步发酵法时间进程第74-75页
　　　　· 一步发酵法条件优化第75-80页
　　　　　　· 葡萄糖浓度对产酶的影响第75-76页
　　　　　　· 玉米浆粉对产酶的影响第76-77页
　　　　　　· pH的影响第77-78页
　　　　　　· 甲醇浓度的影响第78页
　　　　　　· 混合补料第78-79页
　　　　　　· 重组酵母发酵产酶进程第79-80页
　　结论第80-81页
第五章 纤维二糖酶在纤维素水解中的协同作用研究第81-91页
　　引言第81页
　　· 材料与方法第81-86页
　　　　· 纤维原料第81页
　　　　· 试剂第81-82页
　　　　· 酶制剂第82-83页
　　　　· 实验方法第83-86页
　　　　　　· 酸处理第83页
　　　　　　· 纤维物料成分测定第83-84页
　　　　　　· 酶活力测定第84-85页
　　　　　　· 还原糖含量的测定第85页
　　　　　　· 批次酶解第85-86页
　　· 结果与讨论第86-90页
　　　　· 稀酸预处理前后玉米芯成分分析第86页
　　　　· CB协同纤维素酶水解纤维素效果比较第86-87页
　　　　· 批式酶解工艺参数的优化第87-89页
　　　　　　· 酶系组成的影响第87-88页
　　　　　　· 非离子型表面活性剂对酶解的影响第88页
　　　　　　· 微量元素对酶解的影响第88-89页
　　　　· 纤维素酶协同水解玉米芯残渣的时间进程第89-90页
　　结论第90-91页
第六章 结论与建议第91-95页
　　· 结论第91-92页
　　· 展望第92-95页
参考文献第95-107页
附录第107 页

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