论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 1 前言 | 第13-35页 |
| · 立题依据和意义 | 第13-15页 |
| · 鱼类免疫系统组成 | 第15-18页 |
| · 鱼类免疫组织和器官 | 第16-17页 |
| · 鱼类免疫细胞的种类 | 第17-18页 |
| · 鱼类免疫机制研究进展 | 第18-22页 |
| · 鱼类先天性免疫防御机制 | 第19页 |
| · 细胞因子 | 第19-21页 |
| · 呼吸爆发(respiratory burst) | 第21页 |
| · 巨噬细胞增殖 | 第21-22页 |
| · 离子通道概述 | 第22-33页 |
| · 离子通道的分类 | 第25-26页 |
| · 钾离子通道 | 第26-33页 |
| · 花鲈(Lateolabrax japonicus) | 第33-35页 |
| 2 鲈鱼不同类型钾离子通道基因的克隆 | 第35-71页 |
| · 材料与方法 | 第35-45页 |
| · 实验材料 | 第35-36页 |
| · 主要试剂和仪器 | 第36页 |
| · 电压门控型钾离子通道(Kv)基因PCR引物设计 | 第36-37页 |
| · 总RNA的提取 | 第37页 |
| · 逆转录合成cDNA | 第37页 |
| · PCR反应预实验 | 第37-38页 |
| · PCR扩增鲈鱼Kv基因的cDNA序列 | 第38-40页 |
| · 试剂盒回收PCR扩增片段 | 第40页 |
| · PCR扩增片段T-A克隆入载体和序列测定 | 第40-41页 |
| · 用CaCl2制备感受态细胞 | 第41页 |
| · 感受态细胞的转化 | 第41页 |
| · PCR检测含阳性克隆的转化菌落 | 第41页 |
| · 鲈鱼Kv基因的RACE | 第41-44页 |
| · 测序结果验证 | 第44页 |
| · 系统进化树和进化距离 | 第44-45页 |
| · 生物信息学分析 | 第45页 |
| · 实验结果 | 第45-67页 |
| · 鲈鱼不同类型Kv序列全长 | 第45-56页 |
| · 鲈鱼Kv的系统进化树及同源相似性分析 | 第56-61页 |
| · 鲈鱼Kv的结构预测 | 第61-67页 |
| · 讨论 | 第67-69页 |
| · 小结 | 第69-71页 |
| 3 不同类型的钾离子通道在鲈鱼各组织的表达 | 第71-84页 |
| · 材料与方法 | 第71-75页 |
| · 实验材料 | 第71页 |
| · 实验试剂和仪器 | 第71-72页 |
| · RT-PCR和Real-Time PCR引物的设计 | 第72页 |
| · 鲈鱼样本的处理及总RNA的提取 | 第72-73页 |
| · 不同组织中spKv1.1、spKv3.1、spKv1.5、spKv1.2基因的扩增和半定量 | 第73页 |
| · Real-time PCR反应条件及反应体系的优化 | 第73-74页 |
| · Real-time PCR重复性和特异性实验 | 第74页 |
| · Real-time PCR扩增效率比对实验 | 第74页 |
| · 实验数据的输出与分析 | 第74-75页 |
| · 实验结果 | 第75-80页 |
| · 定量引物设计结果 | 第75页 |
| · 不同组织中spKv1.1、spKv3.1、spKv1.5、spKv1.2基因的扩增和半定量 | 第75-76页 |
| · Real-time PCR重复性和特异性实验 | 第76-78页 |
| · 扩增效率比对 | 第78-79页 |
| · 受感染鲈鱼不同组织spKv1.1、spKv3.1、spKv1.5、spKv1.2 mRNA的相对表达量 | 第79-80页 |
| · 讨论 | 第80-84页 |
| 4 不同类型钾离子通道基因在鲈鱼巨噬细胞中的表达分析 | 第84-99页 |
| · 材料与方法 | 第84-90页 |
| · 实验材料 | 第84页 |
| · 主要试剂和仪器 | 第84-86页 |
| · 鲈鱼巨噬细胞分离和培养 | 第86-87页 |
| · 电压门控型钾离子通道(Kv)基因表达引物设计 | 第87-88页 |
| · 鲈鱼巨噬细胞RNA的提取 | 第88页 |
| · 鲈鱼巨噬细胞的收集 | 第88-89页 |
| · Real-time PCR检测鲈鱼Kv的表达 | 第89-90页 |
| · 实验结果 | 第90-96页 |
| · 鲈鱼巨噬细胞培养 | 第90-91页 |
| · PCR反应预实验 | 第91-92页 |
| · Real-time PCR扩增鲈鱼Kv基因 | 第92-94页 |
| · 鲈鱼巨噬细胞Kv基因的表达 | 第94-96页 |
| · 讨论 | 第96-98页 |
| · 小结 | 第98-99页 |
| 5 钾离子通道阻断剂对鲈鱼巨噬细胞免疫功能的影响 | 第99-113页 |
| · 材料与方法 | 第99-103页 |
| · 实验材料 | 第99页 |
| · 主要试剂和仪器 | 第99-101页 |
| · 鲈鱼巨噬细胞的收集 | 第101页 |
| · Real-time PCR分析鲈鱼巨噬细胞因子基因的表达 | 第101-102页 |
| · 鲈鱼巨噬细胞增殖测定 | 第102页 |
| · 鲈鱼巨噬细胞呼吸爆发活性的测定 | 第102-103页 |
| · 实验结果 | 第103-109页 |
| · Real-time PCR扩增鲈鱼细胞因子基因 | 第103-105页 |
| · 钾离子通道阻断剂对鲈鱼巨噬细胞中细胞因子基因的表达的影响 | 第105-106页 |
| · 钾离子通道阻断剂对鲈鱼巨噬细胞增殖的影响 | 第106-108页 |
| · 钾离子通道阻断剂对鲈鱼巨噬细胞呼吸爆发活性的影响 | 第108-109页 |
| · 讨论 | 第109-112页 |
| · 小结 | 第112-113页 |
| 6 本论文的创新点 | 第113-114页 |
| 7 参考文献 | 第114-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
| 个人简历 | 第126页 |
| 发表的学术论文 | 第126页 |
