论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-5
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| 英文摘要 | 第5-9
页 |
| 第一部分 研究背景 | 第9-32
页 |
| 一、肿瘤血管生成和血管生成因子简介 | 第9-19
页 |
| （一） 肿瘤血管生成简介 | 第9-14
页 |
| （二） 血管生成因子简介 | 第14-19
页 |
| 二、血管生成素基因及其研究进展 | 第19-26
页 |
| （一） 血管生成素的结构与性质 | 第19-20
页 |
| （二） 血管生成素的生物学功能 | 第20
页 |
| （三） 血管生成素的作用机制 | 第20-23
页 |
| （四） 血管生成素与肿瘤 | 第23-26
页 |
| 三、bFGF 基因及其研究进展 | 第26-30
页 |
| （一） bFGF 的结构与性质 | 第26-27
页 |
| （二） bFGF 的作用机制 | 第27-29
页 |
| （三） bFGF 的生物学作用 | 第29
页 |
| （四） bFGF 与肿瘤 | 第29-30
页 |
| 四、本论文研究的内容和意义 | 第30-32
页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第32-47
页 |
| 一、实验材料 | 第32-33
页 |
| （一） 质粒 | 第32
页 |
| （二） 哺乳动物细胞系 | 第32
页 |
| （三） 主要试剂 | 第32-33
页 |
| （四） 主要仪器 | 第33
页 |
| 二、实验方法 | 第33-47
页 |
| Ⅰ.分子生物学试验方法 | 第33-39
页 |
| （一） 分子克隆 | 第33
页 |
| （二） DNA 的琼脂糖电泳 | 第33
页 |
| （三） 质粒的大量制备 | 第33-35
页 |
| （四） 哺乳动物细胞基因组的提取及PCR | 第35-36
页 |
| （五） 哺乳动物细胞总 RNA 的提取 | 第36-38
页 |
| （六） 逆转录PCR（Reverse Transcription，RT-PCR） | 第38-39
页 |
| Ⅱ.细胞生物学实验方法 | 第39-45
页 |
| （一） 哺乳动物细胞系的培养 | 第39
页 |
| （二） 真核生物细胞的瞬时转染和稳定转染 | 第39-40
页 |
| （三） 真核生物细胞的瞬时转染和荧光素酶报告基因检测 | 第40-41
页 |
| （四） 蛋白质的SDS-PAGE 和Western Blot 分析 | 第41-43
页 |
| （五） 酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay， ELISA） | 第43-45
页 |
| （六） MTT 细胞活性检测实验 | 第45
页 |
| （七） 集落形成实验 | 第45
页 |
| Ⅲ.统计分析 | 第45-47
页 |
| 第三部分 实验结果与分析 | 第47-78
页 |
| 一、bFGF 对血管生成素表达和肝癌细胞增殖的影响 | 第47-59
页 |
| （一） 高表达和低表达bFGF 的H7402 稳定转染细胞系的建立 | 第47-55
页 |
| （二） 稳定转染正义和反义bFGF 基因对血管生成素基因表达的影响 | 第55-57
页 |
| （三） 稳定转染正义和反义bFGF 基因对H7402 细胞增殖的影响 | 第57-59
页 |
| 二、血管生成素对bFGF 表达的影响 | 第59-63
页 |
| （一） 高表达和低表达血管生成素的HeLa 稳定转染细胞系的建立 | 第59-62
页 |
| （二） 血管生成素负调控bFGF 的表达 | 第62-63
页 |
| 三、血管生成素与bFGF 相互作用关系的分子机制 | 第63-78
页 |
| Ⅰ. 机制一：血管生成素作为反式作用因子参与BFGF 基因的调控 | 第63-74
页 |
| （一） bFGF 启动子报告基因质粒的构建及鉴定 | 第63-70
页 |
| （二） 血管生成素抑制bFGF 基因启动子的活性 | 第70-72
页 |
| （三） 血管生成素在bFGF 基因启动子上作用区间的确定 | 第72-74
页 |
| Ⅱ. 机制二：血管生成素与bFGF 之间可能存在着负反馈调节 | 第74-78
页 |
| （一） bFGF 刺激自身启动子的活性 | 第75-76
页 |
| （二） 外源的bFGF 补偿了血管生成素对bFGF 启动子活性的抑制 | 第76-78
页 |
| 第四部分 讨论 | 第78-81
页 |
| 一、bFGF 在蛋白水平负调控血管生成素的表达 | 第78-79
页 |
| 二、血管生成素负调控bFGF 的表达 | 第79-80
页 |
| 三、血管生成素与bFGF 相互作用关系的分子机制 | 第80-81
页 |
| 主要结论和创新点 | 第81-83
页 |
| 参考文献 | 第83-95
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| 致谢 | 第95-96
页 |
| 作者简介 | 第96-97
页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第97-98
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| 在学期间参加科研项目情况 | 第98
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