论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-10
页 |
| 英文摘要 | 第10-14
页 |
| 英文缩写符号及中英对照表 | 第14-15
页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-41
页 |
| 1 阳离子转运与植物的耐逆性 | 第15-24
页 |
| · Na~~+/H~+ 逆向转运蛋白与植物的耐盐性 | 第15-19
页 |
| · Na~+-ATPase 与植物的耐盐性 | 第19-20
页 |
| · Ca~(2+)/H~+ 逆向转运蛋白与植物的耐逆性 | 第20-21
页 |
| · K~+/H~+ 逆向转运蛋白与K~+ 平衡 | 第21-22
页 |
| · Na~+ 内流与K~+ 吸收 | 第22-24
页 |
| · 其它Cation/H~+ 逆向转运蛋白 | 第24
页 |
| · 小结 | 第24
页 |
| 2 阳离子氯离子共转运体 | 第24-27
页 |
| · 动物中的阳离子氯离子共转运体 | 第24-27
页 |
| · 植物中的阳离子氯离子共转运体 | 第27
页 |
| 3 盐芥——新型耐盐模式植物 | 第27-31
页 |
| · 盐芥作为新型耐盐模式植物的优势 | 第28
页 |
| · 盐芥耐盐的生理及分子生化研究 | 第28-31
页 |
| · 盐芥作为新型耐盐模式植物以后将要重点开展的研究 | 第31
页 |
| 4 MicroRNA 研究进展 | 第31-37
页 |
| · MicroRNA 产生过程 | 第31-34
页 |
| · MicroRNA 的作用机制 | 第34
页 |
| · 植物中保守的miRNA | 第34-35
页 |
| · 植物miRNA 的表达 | 第35-36
页 |
| · 耐逆相关的miRNA | 第36-37
页 |
| 5 脯氨酸与植物的耐逆性 | 第37-41
页 |
| · 脯氨酸的功能 | 第38
页 |
| · 植物体中脯氨酸的合成和降解途径 | 第38-39
页 |
| · 脯氨酸合成的关键酶—Δ1-二氢吡咯-5-羧酸合成酶 | 第39
页 |
| · SiRNA 调控拟南芥中脯氨酸的降解 | 第39-41
页 |
| 第二部分 实验论文 | 第41-100
页 |
| 第一章 水稻KCC 基因的功能研究 | 第41-79
页 |
| 一、实验材料、仪器及方法 | 第41-58
页 |
| 1 | 第41-44
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| · 植物材料 | 第41
页 |
| · 菌种及质粒 | 第41
页 |
| · 引物序列 | 第41-42
页 |
| · 酶及化学试剂 | 第42
页 |
| · 主要仪器设备 | 第42-43
页 |
| · 培养基 | 第43-44
页 |
| · 质粒提取液 | 第44
页 |
| 2 实验方法 | 第44-58
页 |
| · Trizol 试剂提取植物总RNA | 第44
页 |
| · 反转录PCR 扩增 | 第44-45
页 |
| · PCR 产物与T-载体的连接 | 第45-46
页 |
| · 大肠杆菌感受态的制备及转化 | 第46
页 |
| · 质粒的提取 | 第46-47
页 |
| · PCR 及酶切验证水稻KCC 基因 | 第47
页 |
| · 测序验证水稻KCC 基因 | 第47
页 |
| · 水稻KCC 基因5’及3’全序列的拼接 | 第47
页 |
| · 水稻KCC 基因植物表达载体的构建 | 第47-48
页 |
| · 根癌农杆菌AGL1 感受态的制备及转化 | 第48-49
页 |
| · 农杆菌介导的水稻的转化 | 第49-50
页 |
| · 转基因水稻的分子检测 | 第50
页 |
| · 植物基因组DNA 的提取和Southern 杂交 | 第50-52
页 |
| · 转基因水稻的PCR 检测 | 第52-53
页 |
| · 植物总RNA 的提取 | 第53-54
页 |
| · 不同处理条件下水稻KCC 基因以及转基因水稻KCC 基因表达的Real-time PCR 分析 | 第54-56
页 |
| · 转基因水稻的遗传分析 | 第56
页 |
| · 过量表达及基因沉默水稻耐逆性分析 | 第56-58
页 |
| 二、实验结果 | 第58-76
页 |
| 1 水稻KCC 蛋白系统谱系分析 | 第58
页 |
| 2 水稻KCC 蛋白Clustalx 分析及蛋白质结构域分析 | 第58-60
页 |
| 3 水稻KCC 蛋白跨膜分析 | 第60
页 |
| 4 水稻KCC 基因在不同胁迫条件下的特异性表达分析 | 第60-62
页 |
| 5 水稻KCC 基因在水稻不同组织中的表达分析 | 第62
页 |
| 6 水稻KCC 基因的克隆 | 第62-63
页 |
| 7 水稻KCC 基因的测序及拼接 | 第63-65
页 |
| · 水稻KCC 基因5’片段的测序及拼接 | 第63-64
页 |
| · 水稻KCC 基因的测序及全长序列的拼接 | 第64-65
页 |
| 8 植物表达载体的构建 | 第65-66
页 |
| · 过量表达载体 | 第65
页 |
| · GFP 定位载体 | 第65-66
页 |
| · 基因沉默载体 | 第66
页 |
| 9 农杆菌的转化 | 第66-67
页 |
| 10 转基因水稻的遗传分析 | 第67-68
页 |
| · 水稻的转化及转基因水稻的筛选 | 第67
页 |
| · 转基因纯系植株的获得 | 第67-68
页 |
| · 水稻突变体的获得 | 第68
页 |
| 11 转基因水稻的分子检测 | 第68-71
页 |
| · 过量表达OsKCC 基因水稻的PCR 鉴定 | 第68-69
页 |
| · 水稻KCC 蛋白GFP 定位水稻的PCR 鉴定 | 第69
页 |
| · 基因沉默OsKCC 水稻的PCR 鉴定 | 第69
页 |
| · 转基因水稻的Southern 杂交鉴定 | 第69-70
页 |
| · 转基因水稻的实时定量PCR 表达分析 | 第70-71
页 |
| 12 水稻KCC 蛋白的定位 | 第71
页 |
| 13 转基因水稻的耐盐性鉴定 | 第71-76
页 |
| · NaCl 及KCl 对转基因水稻萌发力的影响 | 第71
页 |
| · NaCl 及KCl 对转基因水稻生长的影响 | 第71-72
页 |
| · 盐处理对过量表达、基因沉默与野生型植株干、鲜重的影响 | 第72-74
页 |
| · 过量表达、基因沉默植株与野生型植株中Na~+、K~+ 含量变化情况 | 第74-75
页 |
| · 过量表达、基因沉默植株与野生型植株中K~+、Na~+ 相对含量变化情况 | 第75-76
页 |
| · 过量表达、基因沉默植株与野生型植株中Cl- 含量变化情况 | 第76
页 |
| 三、讨论 | 第76-79
页 |
| 第二章 盐芥小RNA 库的构建及其功能研究 | 第79-100
页 |
| 一、实验材料、仪器及方法 | 第79-87
页 |
| 1 实验材料、仪器 | 第79-80
页 |
| · 植物材料处理 | 第79
页 |
| · 质粒及菌种 | 第79
页 |
| · 化学试剂、主要仪器设备 | 第79
页 |
| · 试剂盒 | 第79
页 |
| · 引物序列 | 第79-80
页 |
| 2 实验方法 | 第80-87
页 |
| · Trizol 试剂提取植物总RNA 及异硫氰酸胍法提取总RNA | 第80
页 |
| · 小分子RNA 的提取 | 第80
页 |
| · 小分子RNA 的聚丙烯酰胺凝胶分离 | 第80
页 |
| · 小分子RNA 的回收 | 第80-81
页 |
| · 小分子RNA 的克隆 | 第81-86
页 |
| · 反转录PCR 扩增及实时定量PCR | 第86
页 |
| · 脯氨酸含量的测定 | 第86-87
页 |
| 二、实验结果 | 第87-98
页 |
| 1 盐芥小RNA 的提取及分离 | 第87
页 |
| 2 盐芥小RNA 的克隆 | 第87-88
页 |
| 3 小RNA 的测序及数据分析 | 第88-93
页 |
| · 不同大小的小RNA 出现的次数 | 第88-89
页 |
| · 小RNA 第一个碱基出现的频率 | 第89
页 |
| · 不同重复数的小RNA 的出现频率 | 第89
页 |
| · MiRNA 前体的预测 | 第89-90
页 |
| · MiRNA target 的预测 | 第90-92
页 |
| · 通过Blast 分析发现保守的miRNA | 第92-93
页 |
| 4 MiRNA 沉默载体的构建 | 第93-94
页 |
| · 拟南芥IP51 基因的克隆及沉默载体的构建 | 第93-94
页 |
| · 经过改造的沉默载体与相应的miRNA 的互补结构 | 第94
页 |
| 5 盐芥中不存在调控脯氨酸降解的SiRNA | 第94
页 |
| 6 盐芥ThSR05 和ThP5CDH 间基因组序列的克隆 | 第94-95
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| 7 盐芥ThSR05 和ThP5CDH 基因3’polyA 位置的鉴定 | 第95-96
页 |
| 8 不同胁迫处理对盐芥中脯氨酸含量的影响 | 第96-97
页 |
| 9 不同胁迫处理对盐芥中ThP5CS、ThP5CDH 和ThSR05 基因含量的影响 | 第97-98
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| 三、讨论 | 第98-100
页 |
| 图版 | 第100-105
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| 参考文献 | 第105-116
页 |
| 致谢 | 第116-117
页 |
| 攻读博士期间发表论文 | 第117
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