论文目录 | |
| 摘要 | 第1-9
页 |
| 第一章 前言 | 第9-43
页 |
| 1 甜蛋白研究进展 | 第10-19
页 |
| 2 毕赤酵母表达系统 | 第19-27
页 |
| 3 透明颤菌血红蛋白研究进展 | 第27-42
页 |
| 本研究的目的和意义 | 第42-43
页 |
| 第二章 优化的高甜度monellin基因在毕赤酵母中的分泌表达 | 第43-71
页 |
| 1 材料与方法 | 第43-59
页 |
| 2 结果与分析 | 第59-69
页 |
| · 高甜度monellin基因的设计、合成 | 第59-60
页 |
| · 高甜度monellin基因的设计 | 第59
页 |
| · 高甜度monellin基因的合成 | 第59-60
页 |
| · 高甜度monellin基因的克隆及鉴定 | 第60-62
页 |
| · 重组分泌表达载体的构建与鉴定 | 第62-64
页 |
| · 重组分泌表达载体转化毕赤酵母及重组酵母的筛选 | 第64-65
页 |
| · 酵母重组子的PCR检测 | 第65
页 |
| · 可分泌表达高甜度monellin重组酵母的初筛 | 第65-66
页 |
| · 酵母重组子的Southern杂交分析 | 第66-67
页 |
| · 重组酵母分泌表达产物的免疫杂交分析(Western blotting) | 第67-68
页 |
| · 高甜度monellin抗体的制备 | 第67-68
页 |
| · 重组酵母分泌表达产物的western blotting分析 | 第68
页 |
| · 摇瓶水平高甜度monellin基因在重组毕赤酵母中的分泌表达 | 第68-69
页 |
| · 重组酵母分泌表达产物的活性检测 | 第69
页 |
| 3 讨论 | 第69-70
页 |
| 小结 | 第70-71
页 |
| 第三章 优化的透明颤菌血红蛋白基因(vgb)在毕赤酵母的胞内表达 | 第71-85
页 |
| 1 材料与方法 | 第71-73
页 |
| 2 结果与分析 | 第73-83
页 |
| · 透明颤菌血红蛋白基因(vgb)的设计、合成 | 第73-74
页 |
| · vgb基因的克隆及鉴定 | 第74-76
页 |
| · 毕赤酵母胞内表达载体的构建及鉴定 | 第76-78
页 |
| · 酵母转化及重组酵母的筛选与鉴定 | 第78
页 |
| · 酵母重组子的PCR检测 | 第78-79
页 |
| · 酵母重组子的Southern杂交分析 | 第79-80
页 |
| · 重组酵母的诱导表达及表达产物检测 | 第80-82
页 |
| · 重组酵母的诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第80-81
页 |
| · 重组酵母的诱导表达特异蛋白的活性检测 | 第81-82
页 |
| · VHb表达对毕赤酵母生长的影响 | 第82-83
页 |
| 3 讨论 | 第83-84
页 |
| 小结 | 第84-85
页 |
| 第四章 透明颤菌血红蛋白基因(vgb)在高甜度monellin基因工程菌中的应用 | 第85-92
页 |
| 1 材料与方法 | 第85-86
页 |
| 2 结果与分析 | 第86-89
页 |
| · pPIC·KV转化酵母GS115/pPIC9KM及重组子的筛选 | 第86
页 |
| · 酵母重组子的PCR检测 | 第86-87
页 |
| · 酵母重组子的诱导表达及表达产物检测 | 第87-89
页 |
| · 重组酵母的诱导表达及高表达monellin重组子的筛选 | 第87
页 |
| · 酵母重组子的诱导表达及胞内外表达产物的检测 | 第87-89
页 |
| · 酵母重组子表达产物的活性检测 | 第89
页 |
| 3 讨论 | 第89-91
页 |
| 小结 | 第91-92
页 |
| 第五章 毕赤酵母工程菌发酵条件的优化 | 第92-104
页 |
| 1 材料与方法 | 第92-95
页 |
| 2 结果与分析 | 第95-102
页 |
| · 转化子摇瓶发酵培养条件的研究 | 第95-101
页 |
| · 碳源对转化子的影响 | 第95
页 |
| · 生物素浓度对高甜度monellin表达的影响 | 第95-96
页 |
| · 接种量对高甜度蛋白monellin表达的影响 | 第96-97
页 |
| · 甲醇浓度对高甜度蛋白monellin表达的影响 | 第97-98
页 |
| · pH对高甜度蛋白monellin表达的影响 | 第98-99
页 |
| · 诱导时间对高甜度蛋白monellin表达的影响 | 第99
页 |
| · 重组毕赤酵母工程菌的发酵条件优化 | 第99-101
页 |
| · 30L发酵罐水平高甜度monellin的表达 | 第101-102
页 |
| 3 讨论 | 第102-103
页 |
| 小结 | 第103-104
页 |
| 结论 | 第104-105
页 |
| 本研究创新点 | 第105-106
页 |
| 参考文献 | 第106-117
页 |
| 简历 | 第117-118
页 |
| 致谢 | 第118页 |
