论文目录 | |
| 摘要 | 第1-10
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| Abstract | 第10-13
页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第13-15
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| 第1章 文献综述 | 第15-33
页 |
| · 猪繁殖与呼吸综合征 | 第15
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| · PRRS 的流行病学特点 | 第15-17
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| · PRRSV 病原特性 | 第17-19
页 |
| · PRRSV 的分类 | 第17
页 |
| · PRRSV 的理化学特性 | 第17
页 |
| · PRRSV 的抗原性 | 第17-18
页 |
| · PRRSV 的细胞培养特性 | 第18-19
页 |
| · PRRSV 的致病机理 | 第19
页 |
| · PRRSV 分子生物学研究进展 | 第19-28
页 |
| · PRRSV 基因组的结构与功能 | 第19-22
页 |
| · PRRSV 的蛋白质 | 第22-25
页 |
| · PRRSV 的基因组变异和RNA 重组 | 第25-27
页 |
| · PRRSV 的抗原性变异 | 第27
页 |
| · PRRSV 的毒力变异 | 第27-28
页 |
| · 正链RNA 病毒的感染性克隆的概述 | 第28-33
页 |
| · RNA 病毒反向遗传操作技术体系的提出 | 第28-29
页 |
| · 正链RNA 病毒的感染性克隆的操作 | 第29-33
页 |
| 第2章 研究目的和意义 | 第33-35
页 |
| 第3章 材料与方法 | 第35-52
页 |
| · 毒株、细胞、菌株及质粒 | 第35-36
页 |
| · 酶及主要试剂 | 第36-37
页 |
| · 培养基与抗生素及其配制 | 第37-38
页 |
| · 缓冲液 | 第38-39
页 |
| · 病毒的大量增殖、浓缩和纯化 | 第39-40
页 |
| · 病毒的增殖 | 第39
页 |
| · 病毒的浓缩、纯化 | 第39-40
页 |
| · 病毒RNA 的提取 | 第40
页 |
| · 全基因组的反转录聚合酶链式反应（RT-PCR） | 第40-42
页 |
| · 引物设计合成 | 第40-41
页 |
| · 病毒基因组的反转录 | 第41
页 |
| · 病毒cDNA 的PCR 扩增 | 第41-42
页 |
| · 全基因组cDNA 的克隆 | 第42-45
页 |
| · PCR 产物的回收与纯化 | 第42
页 |
| · 连接反应 | 第42-43
页 |
| · 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第43
页 |
| · 连接产物的转化 | 第43-44
页 |
| · 质粒DNA 的小量制备（碱裂解法） | 第44
页 |
| · 限制性内切酶酶切反应 | 第44-45
页 |
| · PRRSV 全基因组毒株序列测定与分析 | 第45
页 |
| · 全基因组cDNA 的连接 | 第45-47
页 |
| · PCR 产物或酶切产物的电泳检测 | 第45-46
页 |
| · 线性质粒DNA 末端去磷酸化 | 第46
页 |
| · 外源DNA 片段与质粒载体的连接反应 | 第46
页 |
| · 质粒的制备与鉴定 | 第46-47
页 |
| · 全长质粒pOK-Clone20 质粒转染（脂质体介导转染法） | 第47-48
页 |
| · RT-PCR 法检测恢复病毒 | 第48
页 |
| · PRRSV 复制子cDNA 的连接 | 第48
页 |
| · PRRSV 复制子在BHK-21 细胞内的表达 | 第48-49
页 |
| · 复制子质粒pOK-Clone20-rep 质粒转染 | 第48
页 |
| · 转染后的荧光检测 | 第48-49
页 |
| · 流式细胞检测 | 第49
页 |
| · RT-PCR 检测EGFP mRNA 和N mRNA | 第49
页 |
| · 动物试验 | 第49
页 |
| · N-ELISA 试验 | 第49-50
页 |
| · EGFP-ELISA 试验 | 第50
页 |
| · 细胞免疫的检测 | 第50-52
页 |
| · 小鼠脾淋巴细胞的制备 | 第50
页 |
| · 淋巴细胞增殖反应试验（Lymphocytes Proliferation） | 第50-51
页 |
| · 实时荧光定量 PCR 检测免疫小鼠脾细胞中的 IFN-γ 相对表达水平 | 第51-52
页 |
| 第4章 结果与分析 | 第52-84
页 |
| · PRRSV Clone20 株全基因组序列的测定及序列分析 | 第52-63
页 |
| · 病毒纯化 | 第52
页 |
| · 病毒基因组亚克隆片段的RT-PCR 扩增结果 | 第52-53
页 |
| · 亚克隆质粒的构建与鉴定 | 第53-56
页 |
| · 亚克隆质粒序列测定和病毒基因组全序列拼接 | 第56
页 |
| · PRRSV Clone20 株全基因组序同源性和进化树列分析 | 第56-60
页 |
| · PRRSV 在进化过程中的重组分析 | 第60-63
页 |
| · PRRSV Clone20 株全基因组感染性cDNA 克隆的构建 | 第63-70
页 |
| · PRRSV 基因组全长cDNA 的构建 | 第63-69
页 |
| · PRRSV 感染性病毒的拯救 | 第69-70
页 |
| · PRRSV 复制子载体研究 | 第70-84
页 |
| · PRRSV 复制子cDNA 的构建 | 第70-77
页 |
| · PRRSV 复制子在BHK-21 细胞内的表达 | 第77-81
页 |
| · 免疫小鼠的模式基因（EGFP）的ELISA 抗体水平 | 第81-82
页 |
| · 免疫小鼠的复制子载体N 蛋白基因的ELISA 抗体水平 | 第82
页 |
| · 实时荧光定量PCR 检测免疫小鼠脾细胞中 IFN-γmRNA 表达 | 第82-84
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| 第5章 讨论与结论 | 第84-92
页 |
| · 讨论 | 第84-91
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| · 关于PRRSV 全基因组序列的测定及序列分析 | 第84-85
页 |
| · 关于PRRSV 全基因组感染性cDNA 克隆的构建 | 第85-88
页 |
| · 关于PRRSV 的复制子载体的研究 | 第88-91
页 |
| · 结论 | 第91-92
页 |
| 参考文献 | 第92-109
页 |
| 致谢 | 第109-110
页 |
| 附录 | 第110
页 |
