论文目录 | |
| 中文摘要 | 第11-13
页 |
| 前言 | 第13-15
页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-42
页 |
| 第一节 1,3-丙二醇生产现状及应用前景 | 第15-23
页 |
| 一、1,3-丙二醇概况 | 第15
页 |
| 二、1,3-丙二醇的应用 | 第15-16
页 |
| 三、1,3-丙二醇的生产历史和现状 | 第16-17
页 |
| 四、1,3-丙二醇生物合成法的研究进展 | 第17-22
页 |
| 五、1,3-丙二醇生物合成法存在问题及对策 | 第22
页 |
| 六、基因改造的应用前景与未来与展望 | 第22-23
页 |
| 第二节 1,3-丙二醇生物合成途径和1,3-丙二醇合成酶 | 第23-29
页 |
| 一、1,3-丙二醇生物合成途径 | 第23-24
页 |
| 二、1,3-丙二醇合成酶 | 第24-29
页 |
| 第三节 1,3-丙二醇生物合成途径中限速酶—甘油脱水酶的研究进展 | 第29-38
页 |
| 一、甘油脱水酶的概况 | 第29
页 |
| 二、甘油脱水酶的结构与性质 | 第29-32
页 |
| 三、甘油脱水酶基因的分子结构 | 第32-33
页 |
| 四、甘油脱水酶基因工程的国内外研究进展 | 第33-35
页 |
| 五、本研究的目的和意义 | 第35-37
页 |
| 六、实验整体技术路线 | 第37-38
页 |
| 参考文献 | 第38-42
页 |
| 第二章 肺炎克氏杆菌发酵生产1,3-丙二醇的研究 | 第42-55
页 |
| 摘要 | 第42
页 |
| 前言 | 第42-43
页 |
| 一、材料和方法 | 第43-44
页 |
| 1、培养方法 | 第43-44
页 |
| 2、厌氧培养基的制备 | 第44
页 |
| 3、测定方法 | 第44
页 |
| 4、生长曲线测定 | 第44
页 |
| 5、细菌形态的观察方法 | 第44
页 |
| 二、结果与分析 | 第44-50
页 |
| 三、讨论 | 第50-52
页 |
| (一) 关于发酵培养基对1,3-丙二醇产量的影响 | 第50-51
页 |
| (二) 关于发酵培养方式对1,3-丙二醇产量的影响 | 第51-52
页 |
| (三) 关于甘油两种代谢途径对1,3-丙二醇的产量的影响 | 第52
页 |
| 本章小结 | 第52-53
页 |
| 参考文献 | 第53-55
页 |
| 第三章 肺炎克氏杆菌甘油脱水酶基因的克隆及序列分析 | 第55-99
页 |
| 摘要 | 第55
页 |
| 前言 | 第55-56
页 |
| 第一节 基因组DNA 的提取及目的酶基因引物的筛选 | 第56-62
页 |
| 一、材料和方法 | 第56-61
页 |
| 1、肺炎克氏杆菌基因组DNA 的提取与纯化 | 第58-59
页 |
| 2、 1% 琼脂糖凝胶电泳分析 | 第59-60
页 |
| 3、目的酶基因引物的设计 | 第60
页 |
| 4、从不同基因组DNA 中进行PCR 扩增 | 第60-61
页 |
| 二、结果与分析 | 第61-62
页 |
| 第二节 甘油脱水酶α亚基基因的克隆、鉴定与序列分析 | 第62-79
页 |
| 一、材料与方法 | 第62-69
页 |
| 1、PCR 方法扩增gldA 基因 | 第64
页 |
| 2、目的扩增片段的回收 | 第64-65
页 |
| 3、PCR 产物与pMD18-T 载体直接连接 | 第65
页 |
| 4、感受态细胞的制备 | 第65-66
页 |
| 5、重组质粒的转化 | 第66
页 |
| 6、菌落PCR 筛选阳性克隆 | 第66-67
页 |
| 7、植菌 | 第67
页 |
| 8、质粒的小量提取与纯化 | 第67-68
页 |
| 9、重组质粒pMD18-T-gldA 的酶切鉴定和PCR 鉴定 | 第68-69
页 |
| 10、重组质粒pMD18-T-gldA 的测序鉴定 | 第69
页 |
| 二、结果与分析 | 第69-79
页 |
| 第三节 甘油脱水酶β亚基基因的克隆与序列分析 | 第79-86
页 |
| 一、材料与方法 | 第79-81
页 |
| 二、结果与分析 | 第81-86
页 |
| 第四节 甘油脱水酶γ亚基基因的克隆与序列分析 | 第86-93
页 |
| 一、材料与方法 | 第86-87
页 |
| 二、结果与分析 | 第87-93
页 |
| 第五节 讨论 | 第93-96
页 |
| 一、关于肺炎克氏杆菌菌株基因组DNA 的提取 | 第93
页 |
| 二、关于引物设计 | 第93-95
页 |
| 三、关于PCR 反应 | 第95-96
页 |
| 本章小结 | 第96-97
页 |
| 参考文献 | 第97-99
页 |
| 第四章 肺炎克氏杆菌甘油脱水酶单亚基基因表达载体的构建 | 第99-127
页 |
| 摘要 | 第99
页 |
| 前言 | 第99-100
页 |
| 第一节 甘油脱水酶α亚基基因的表达载体的构建 | 第100-109
页 |
| 一、材料与方法 | 第100-105
页 |
| 1、PCR 方法从质粒pMD18-T-gldA 中扩增gldA 基因 | 第101-102
页 |
| 2、PCR 扩增产物回收 | 第102
页 |
| 3、PCR 回收产物的酶切处理 | 第102
页 |
| 4、空的表达载体pMAL-c2X 的Xmn I 酶切处理 | 第102-103
页 |
| 5、经 Xmn I 酶切后的表达载体pMAL-c2X 的 Xba I 酶切处理 | 第103
页 |
| 6、PCR 产物和pMAL-c2X 载体连接 | 第103
页 |
| 7、重组质粒的电转化 | 第103-104
页 |
| 8、菌落PCR 筛选阳性克隆 | 第104
页 |
| 9、质粒的提取与纯化 | 第104
页 |
| 10、重组质粒pMAL-gldA 的酶切鉴定和PCR 鉴定 | 第104-105
页 |
| 11、重组质粒pMAL-gldA 的测序鉴定 | 第105
页 |
| 二、结果与分析 | 第105-109
页 |
| 第二节 甘油脱水酶β亚基基因的表达载体的构建 | 第109-116
页 |
| 一、材料与方法 | 第109-113
页 |
| 二、结果与分析 | 第113-116
页 |
| 第三节 甘油脱水酶γ亚基基因的表达载体的构建 | 第116-123
页 |
| 一、材料与方法 | 第116-120
页 |
| 二、结果与分析 | 第120-123
页 |
| 第四节 讨论 | 第123-125
页 |
| 一、关于基因克隆方式的选择 | 第123
页 |
| 二、关于定向克隆时酶切位点的选择 | 第123-124
页 |
| 三、关于载体构建 | 第124-125
页 |
| 本章小结 | 第125
页 |
| 参考文献 | 第125-127
页 |
| 第五章 肺炎克氏杆菌甘油脱水酶三亚基基因表达载体的构建 | 第127-153
页 |
| 摘要 | 第127
页 |
| 前言 | 第127-128
页 |
| 第一节 甘油脱水酶基因在表达载体pMAL-c2X 上的构建 | 第128-139
页 |
| 一、材料与方法 | 第128-134
页 |
| 1、融合基因gldBC 的合成和克隆载体pSIM-gldBC 的构建 | 第129-132
页 |
| 2、融合表达载体pMAL-gldABC 的构建 | 第132-134
页 |
| 二、结果与分析 | 第134-139
页 |
| 第二节 甘油脱水酶基因在表达载体pGEX-4T-1 上的构建 | 第139-149
页 |
| 一、材料与方法 | 第139-146
页 |
| 1、融合表达载体pGEX-gldBC 的构建 | 第139-141
页 |
| 2、克隆载体pSIM-T-gldA 的构建 | 第141-143
页 |
| 3、融合表达载体pGEX-gldABC 的构建 | 第143-146
页 |
| 二、结果与分析 | 第146-149
页 |
| 第三节 讨论 | 第149-151
页 |
| 一、关于高效表达载体的选择 | 第149-150
页 |
| 二、关于同向串联表达载体的构建 | 第150-151
页 |
| 本章小结 | 第151
页 |
| 参考文献 | 第151-153
页 |
| 第六章 结论与展望 | 第153-158
页 |
| 一、主要结论 | 第153-155
页 |
| 二、本论文创新点 | 第155
页 |
| 三、有待于进一步开展的工作 | 第155-156
页 |
| 四、展望 | 第156-158
页 |
| 致谢 | 第158-159
页 |
| 英文摘要 | 第159-161
页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第161
页 |
