论文目录 | |
| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 英文缩略符及其中英文对照表 | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-32页 |
| 1 缺磷信号转导途径相关基因 | 第16-30页 |
| · 转录因子基因 | 第16-21页 |
| · PHF1 | 第21页 |
| · AtSIZ1 | 第21-22页 |
| · microRNA | 第22-25页 |
| · TPSI1-Mt4,At4/IPS1 | 第25-26页 |
| · PHO | 第26页 |
| · SPX家族 | 第26-30页 |
| 2 菌根共生信号转导途径相关基因 | 第30-31页 |
| 3 结语 | 第31-32页 |
| 第二章 研究方案及技术路线 | 第32-34页 |
| 第三章 烟草中miRNA的生物信息学预测 | 第34-44页 |
| 1 引言 | 第34-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-36页 |
| · 生物材料 | 第35页 |
| · 烟草GSS和EST序列及植物中已知miRNA成熟片段序列的获得 | 第35页 |
| · 烟草中保守miRNA的预测 | 第35-36页 |
| · 烟草缺磷处理 | 第36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-41页 |
| · 所预测miRNA各家族成员数统计 | 第36-37页 |
| · 所预测miRNA成熟片段及前体长度分布 | 第37-38页 |
| · 所预测miRNA特征参数统计 | 第38-39页 |
| · 部分miRNA二级结构折叠 | 第39-40页 |
| · 烟草miRNA399和miRNA827家族部分成员表达模式研究 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-44页 |
| 第四章 缺磷和菌根侵染条件下番茄中miRNA表达谱的芯片分析及验证 | 第44-56页 |
| 1 引言 | 第44-45页 |
| 2 材料与方法 | 第45-46页 |
| · 生物材料 | 第45页 |
| · 番茄缺磷和菌根侵染处理 | 第45页 |
| · 采样 | 第45页 |
| · 菌根真菌侵染率的测定 | 第45页 |
| · miRNA芯片制作及数据处理 | 第45-46页 |
| · RNA提取及poly(A)-tailed RT-PCR分析 | 第46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-52页 |
| · 加磷、缺磷及缺磷加菌根三种处理材料的检测 | 第46-47页 |
| · miRNA芯片结果筛选 | 第47-48页 |
| · miRNA芯片结果的验证 | 第48-50页 |
| · 差异表达miRNA靶基因的生物信息学预测及功能分类 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-56页 |
| 第五章 缺磷诱导OsmiR827a及其靶基因的生物信息学和表达模式分析 | 第56-74页 |
| 1 引言 | 第56页 |
| 2 材料与方法 | 第56-60页 |
| · 生物材料 | 第56-57页 |
| · OsmiR827a靶基因的预测 | 第57页 |
| · OsSPX7和OsSPX8氨基酸序列及结构域分析 | 第57页 |
| · 水稻和拟南芥中SPX家族成员进化树分析 | 第57页 |
| · OsSPX7、OsSPX8及部分SPX家族其它成员亚细胞定位分析 | 第57页 |
| · RT-PCR检测分析 | 第57-58页 |
| · OsmiR827a、OsSPX7和OsSPX8启动子序列分析 | 第58页 |
| · 农杆菌介导的水稻转基因 | 第58-60页 |
| · GUS报告基因的检测 | 第60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-70页 |
| · miR827成熟片段在不同物种间的保守性分析 | 第60-61页 |
| · OsmiR827a靶基因的预测及分析 | 第61-66页 |
| · 缺磷信号对OsmiR827a、OsSPX7和OsSPX8表达的影响 | 第66-68页 |
| · OsmiR827a、OsSPX7和OsSPX8启动子及组织定位分析 | 第68-70页 |
| 4 讨论 | 第70-74页 |
| 第六章 OsmiR827a及其靶基因的功能研究 | 第74-88页 |
| 1 引言 | 第74-75页 |
| 2 材料与方法 | 第75页 |
| · 生物材料 | 第75页 |
| · 农杆菌介导的水稻转基因 | 第75页 |
| · 植物有效磷浓度的测定 | 第75页 |
| · RT-PCR检测分析 | 第75页 |
| 3 结果与分析 | 第75-85页 |
| · OsmiR827a过量表达植株的获得和鉴定 | 第75-76页 |
| · OsSPX7和OsSPX8突变纯合体的鉴定 | 第76-77页 |
| · OsSPX7和OsSPX8突变纯合体敲除效果的检测 | 第77-78页 |
| · OsSPX7和OsSPX8突变体在不同供磷处理下的表型分析 | 第78-81页 |
| · OsSPX7和OsSPX8突变体在不同供憐处理下有效確浓度的变化 | 第81-83页 |
| · OsSPX7和OsSPX8突变对缺磷信号转导途径中其它基因转录水平表达的影响 | 第83-85页 |
| · OsPHR2对OsmiR827a的调控分析 | 第85页 |
| 4 讨论 | 第85-88页 |
| 第七章 番茄和烟草PHT1；4基因启动子功能区域分析 | 第88-100页 |
| 1 引言 | 第88-89页 |
| 2 材料与方法 | 第89-90页 |
| · 生物材料 | 第89页 |
| · 重叠延伸PCR | 第89页 |
| · 烟草转基因操作 | 第89-90页 |
| · 凝胶阻滞实验 | 第90页 |
| 3 结果与分析 | 第90-98页 |
| · LePT4启动子序列分析 | 第90-91页 |
| · LePT4启动子分割及定点突变 | 第91-93页 |
| · 不同长度及定点突变LePT4启动子组织特异活性分析 | 第93-94页 |
| · NtPT4启动子片段与核蛋白体外结合活性分析 | 第94-97页 |
| · 顺式调控元件P1BS在NtPT4响应菌根信号过程中功能解析 | 第97-98页 |
| 4 讨论 | 第98-100页 |
| 第八章 烟草缺磷和菌根信号途径转录因子基因NtPHR2和NtMYCF1的克隆、分析及表达模式研究 | 第100-110页 |
| 1 引言 | 第100页 |
| 2 材料与方法 | 第100-102页 |
| · 生物材料 | 第100页 |
| · cDNA全长扩增 | 第100-101页 |
| · MYB-CC家族成员进化树分析 | 第101页 |
| · 基因枪轰击洋葱表皮的亚细胞定位实验 | 第101页 |
| · 金粉的清洗 | 第101页 |
| · DNA质粒包埋金粉 | 第101页 |
| · 荧光显微镜观察 | 第101页 |
| · 酵母双杂交实验 | 第101-102页 |
| 3 结果与分析 | 第102-107页 |
| · 烟草中PHR同源基因cDNA全长的克隆及序列、进化树分析 | 第102-103页 |
| · NtMYCF1和NtPHR2亚细胞定位分析 | 第103-104页 |
| · NtMYCF1和NtPHR2在缺磷及菌根共生条件下的表达模式分析 | 第104-105页 |
| · NtMYCF1和NtPHR2在蛋白水平互作分析 | 第105-107页 |
| 4 讨论 | 第107-110页 |
| 全文结论 | 第110-112页 |
| 创新点 | 第112-114页 |
| 参考文献 | 第114-130页 |
| 附录 | 第130-154页 |
| 在读期间发表的论文 | 第154-156页 |
| 致谢 | 第156-157
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