论文目录 | |
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| · 糖生物学概况 | 第7页 |
| · 糖鞘脂 | 第7-8页 |
| · 糖鞘脂的结构 | 第7-8页 |
| · 糖鞘脂的功能 | 第8页 |
| · 糖鞘脂Gg4在EMT过程中的研究 | 第8-10页 |
| · EMT过程 | 第8-9页 |
| · 糖鞘脂Gg4在EMT过程中表达下调 | 第9-10页 |
| · β1, 3半乳糖基转移酶4表达下调是EMT过程中Gg4下调的主要原因 | 第10页 |
| · EMT过程中β3GalT4的转录调控 | 第10-12页 |
| · EMT过程中的TGF-β/Smads信号通路 | 第10-11页 |
| · β3GalT4的转录调控 | 第11页 |
| · 基因转录调控机制的研究方法 | 第11-12页 |
| · 研究蛋白功能的一般策略 | 第12-13页 |
| · 哺乳动物细胞中基因的过表达及沉默 | 第12-13页 |
| · 毕赤酵母真核表达系统 | 第13页 |
| · 大肠杆菌原核表达系统 | 第13页 |
| · 立题依据及意义 | 第13-14页 |
| · 本论文的主要研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-26页 |
| · 材料 | 第15-20页 |
| · 菌株、细胞株、组织样本、质粒及引物 | 第15-17页 |
| · 培养基 | 第17页 |
| · 主要试剂 | 第17-20页 |
| · 主要仪器 | 第20页 |
| · 方法 | 第20-26页 |
| · 细胞培养 | 第20-21页 |
| · 大肠杆菌原核表达质粒构建、蛋白诱导表达及纯化 | 第21-22页 |
| · 凝胶滞留实验(EMSA) | 第22页 |
| · 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第22-23页 |
| · 荧光定量PCR (Real-time PCR) | 第23-24页 |
| · β3GalT4真核表达质粒及RNA干扰重组质粒构建 | 第24页 |
| · 动物细胞总糖脂的提取 | 第24页 |
| · 薄层层析和免疫印迹 | 第24-25页 |
| · 胶体金及MTT实验 | 第25页 |
| · 鼠源β3GalT4标签蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第25-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-39页 |
| · 转录因子Smad3/4对β3GalT4因转录调控机制的研究 | 第26-30页 |
| · Smad3与Smad4蛋白的载体构建、诱导表达和纯化 | 第26-27页 |
| · EMSA验证Smad3/4复合物与β3GalT4启动子区的结合情况 | 第27-28页 |
| · ChIP实验验证Smad3/Smad4复合物与β3GalT4启动子区的结合情况 | 第28-29页 |
| · β3GalT4的表达水平在人的乳腺癌样本中普遍下调 | 第29-30页 |
| · 实验小结 | 第30页 |
| · 过表达和沉默Gg4对NMuMG细胞迁移的影响 | 第30-34页 |
| · pcDNA-β3GalT4表达载体的构建及验证 | 第31页 |
| · pSUPER-β3GalT4 shRNA1, 2, 3号表达载体的构建及验证 | 第31-32页 |
| · β3GalT4过表达NMuMG细胞株的筛选 | 第32页 |
| · β3GalT4沉默NMuMG细胞株的筛选 | 第32-33页 |
| · β3GalT4过表达和沉默细胞株Gg4的表达 | 第33页 |
| · 过表达和沉默Gg4对NMuMG细胞形态、迁移及增殖的影响 | 第33-34页 |
| · 实验小结 | 第34页 |
| · 鼠源和人源β3GalT4在P. pastorsi和E. coli中的表达 | 第34-39页 |
| · pPIC9K-β3GalT4 (Mouse)载体构建及在毕赤酵母中的诱导表达 | 第35-37页 |
| · 鼠源和人源β3GalT4在大肠杆菌中的诱导表达 | 第37-38页 |
| · 实验小结 | 第38-39页 |
| 主要结论与展望 | 第39-40页 |
| 主要结论 | 第39页 |
| 展望 | 第39-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-44页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第44
页 |
