论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6
页 |
| Abstract | 第6-12
页 |
| 第一章 绪论 | 第12-29
页 |
| · 研究的目的及意义 | 第12
页 |
| · 国内外研究进展 | 第12-28
页 |
| · 口蹄疫基因工程疫苗研究进展 | 第12-18
页 |
| · 逆转录病毒载体系统及其应用研究进展 | 第18-24
页 |
| · 病毒样颗粒及其应用的研究进展 | 第24-28
页 |
| · 研究方法和内容 | 第28-29
页 |
| 第二章 口蹄疫病毒聚蛋白P1缺失突变体对空衣壳形成影响的初步研究 | 第29-41
页 |
| · 材料和方法 | 第29-36
页 |
| · 载体、质粒、宿主菌、细胞和重组病毒 | 第29
页 |
| · 工具酶、试剂盒和其他试剂 | 第29
页 |
| · 引物设计 | 第29-30
页 |
| · 含P1序列不同长度缺失真核表达载体的构建 | 第30-34
页 |
| · 表达载体转染BHK-21细胞 | 第34-35
页 |
| · 收获表达产物及其检测 | 第35-36
页 |
| · 不同含量的3C对P1聚蛋白裂解形成空衣壳的影响 | 第36
页 |
| · 结果 | 第36-39
页 |
| · 质粒pGEM—P1-FLAG和pGEM4Z-3C转染细胞后目的蛋白表达 | 第36-37
页 |
| · 质粒pGEM—P1-FLAG、pGEM—P1-FLAG—DM1、pGEM—P1-FLAG—DM2、pGEM—P1-FLAG—DM3、pGEM—P1-FLAG—DM4、pGEM4Z-3C转染细胞后目的蛋白表达 | 第37-38
页 |
| · 质粒pGEM—P1-FLAG和不同含量pGEM4Z-3C转染细胞后蛋白表达 | 第38-39
页 |
| · 讨论 | 第39-41
页 |
| 第三章 逆转录病毒载体介导的FMDV P1-2A和3C编码序列的转移及稳定表达空衣壳蛋白细胞系的建立 | 第41-64
页 |
| · 材料和方法 | 第41-53
页 |
| · 病毒、宿主菌、载体、细胞 | 第41
页 |
| · 工具酶、T载体、试剂盒和其它试剂 | 第41
页 |
| · 引物设计 | 第41-42
页 |
| · 病毒RNA提取和反转录 | 第42-43
页 |
| · P1-2A和3C编码序列的扩增及产物回收 | 第43-44
页 |
| · PCR纯化产物与T载体连接、转化和质粒提取 | 第44-46
页 |
| · 重组逆转录病毒载体的构建 | 第46-50
页 |
| · 重组逆转录假型病毒的包装和感染靶细胞 | 第50-52
页 |
| · 稳定表达空衣壳蛋白MDBK细胞的鉴定 | 第52-53
页 |
| · 结果 | 第53-61
页 |
| · P1-2A和3C编码序列RT—PCR结果 | 第53-54
页 |
| · 重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-3C鉴定 | 第54-56
页 |
| · 嘌呤霉素对MDBK细胞最小致死浓度和重组病毒滴度的测定结果 | 第56
页 |
| · 目的基因整合鉴定 | 第56-57
页 |
| · 空衣壳在细胞中表达鉴定 | 第57-58
页 |
| · 细胞连续传代后目的基因的整合及空衣壳蛋白的表达 | 第58-60
页 |
| · FMDV空衣壳的电镜观察 | 第60-61
页 |
| · 讨论 | 第61-64
页 |
| 第四章 稳定表达空衣壳蛋白MDBK细胞的动物免疫试验 | 第64-72
页 |
| · 材料和方法 | 第64-67
页 |
| · 病毒、细胞、商品疫苗、实验动物 | 第64
页 |
| · 试剂 | 第64
页 |
| · 抗原制备及浓缩 | 第64-65
页 |
| · 抗原乳化 | 第65
页 |
| · 实验动物免疫 | 第65
页 |
| · 血清抗体监测 | 第65-66
页 |
| · 中和抗体检测 | 第66
页 |
| · 攻毒保护试验 | 第66-67
页 |
| · 结果 | 第67-70
页 |
| · 豚鼠体内FMDV特异性抗体的动态变化 | 第67
页 |
| · FMDV A型AV/88的毒价 | 第67-68
页 |
| · 豚鼠血清中的FMDV中和抗体效价 | 第68-69
页 |
| · 攻毒保护实验 | 第69-70
页 |
| · 讨论 | 第70-72
页 |
| 第五章 全文结论 | 第72-73
页 |
| 参考文献 | 第73-84
页 |
| 致谢 | 第84-85
页 |
| 作者简历 | 第85页 |
