论文目录 | |
| 第一章 文献综述 | 第1-29
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| · 小麦黄花叶病毒的研究进展 | 第9-18
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| · 生物学特性 | 第9-10
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| · 分子生物学特性 | 第10-16
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| · 大麦黄花叶病毒属(Bymovirus)病毒的特性 | 第16-18
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| · 植物RNA病毒的侵染性cDNA克隆 | 第18-21
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| · 侵染性cDNA克隆的构建 | 第18
页 |
| · 侵染性cDNA克隆的类型 | 第18-19
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| · 影响侵染性cDNA克隆生物活性的因素 | 第19-21
页 |
| · 植物细胞系在分子植物病毒学研究中的应用 | 第21-26
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| · 植物组织细胞的培养 | 第21
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| · 原生质体的分离 | 第21-23
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| · 病毒及病毒RNA对植物细胞和原生质体的侵染 | 第23-26
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| · GFP在植物病毒研究上的应用 | 第26-28
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| · 绿色荧光蛋白 | 第26
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| · 应用绿色荧光蛋白研究病毒的运动 | 第26-28
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| · 研究的目的和意义 | 第28-29
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| 第二章 小麦黄花叶病毒侵染性cDNA克隆及细胞侵染体系的建立 | 第29-61
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| · 材料 | 第29-31
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| · 毒源和血清 | 第29
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| · 菌株、载体和质粒 | 第29
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| · 酶和化学试剂 | 第29-30
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| · 引物 | 第30
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| · 细胞 | 第30
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| · 培养基和缓冲液的配制 | 第30-31
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| · 仪器设备 | 第31
页 |
| · 方法 | 第31-35
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| · 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第31-32
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| · 重组质粒的快速鉴定(Cracking) | 第32
页 |
| · 质粒DNA的小量提取 | 第32
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| · 质粒DNA的大量提取 | 第32
页 |
| · DNA片段的回收纯化 | 第32-33
页 |
| · 质粒的酶切和连接方法 | 第33
页 |
| · PCR反应体系 | 第33
页 |
| · 反转录反应体系 | 第33-34
页 |
| · 体外转录反应体系 | 第34
页 |
| · 植物总RNA的提取 | 第34
页 |
| · 小麦黄花叶病毒提取及纯化 | 第34-35
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| · 病毒RNA提取 | 第35
页 |
| · 侵染性全长cDNA克隆的构建 | 第35-39
页 |
| · 5′RACE-PCR(Rapid amplification of cDNA End) | 第35
页 |
| · T7启动子控制下的全长克隆的构建 | 第35-39
页 |
| · 细胞组织培养技术 | 第39-40
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| · 小麦愈伤组织的培养和胚性细胞系的建立 | 第39
页 |
| · 烟草细胞的悬浮培养及原生质体的分离 | 第39-40
页 |
| · 转染 | 第40-42
页 |
| · 小麦细胞的质壁分离转化 | 第40-41
页 |
| · BY-2烟草原生质体的电击转化 | 第41-42
页 |
| · 体外转录物接种后的表达检测 | 第42-44
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| · SDS-PAGE和WesternBlotting检测 | 第42-43
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| · Northernblot检测 | 第43-44
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| · 结果与分析 | 第44-56
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| · 5′RACE结果 | 第44-46
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| · T7启动子控制下的全长cDNA克隆的构建 | 第46-50
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| · 体外转录物对BY-2烟草原生质体和小麦细胞的侵染 | 第50-56
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| · 讨论 | 第56-61
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| · 侵染性克隆的构建 | 第56-57
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| · 侵染体系的建立 | 第57-61
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| 第三章 小麦黄花叶病毒编码的P1蛋白功能的探索性研究 | 第61-76
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| · 材料 | 第61-62
页 |
| · 引物 | 第61-62
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| · 菌株和植物材料 | 第62
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| · 质粒 | 第62
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| · 仪器设备 | 第62
页 |
| · 瞬时表达载体的构建 | 第62-68
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| · pSK76-GFP及pBIN76-GFP的构建 | 第62-64
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| · pSKP1-GFP及pBINP1-GFP的构建 | 第64-65
页 |
| · pSKGFP-P1及pBINGFP-P1的构建 | 第65-67
页 |
| · 突变体的构建 | 第67-68
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| · 电击转化 | 第68
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| · 农杆菌注射 | 第68
页 |
| · 农杆菌感受态细胞的制备 | 第68
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| · 植物表达载体向农杆菌感受态细胞的转化 | 第68
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| · Agro-infiltration方法接种本生烟 | 第68
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| · GFP荧光观察 | 第68-69
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| · 结果与分析 | 第69-74
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| · 瞬时表达载体的构建 | 第69-71
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| · 荧光观察 | 第71-74
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| · 农杆菌注射接种观察结果 | 第74
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| · 讨论 | 第74-76
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| 结论与设想 | 第76-77
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| 参考文献 | 第77-88
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| 致谢 | 第88-89
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| 附录Ⅰ GENE PULSERⅡ使用方法 | 第89-92
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| 附Ⅰ.1 E.coli转化 | 第89-90
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| 附Ⅰ.2 附件为CAPACITANCE EXTENDERⅡ(用来电击细胞) | 第90-91
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| 附Ⅰ.3 注意事项 | 第91-92
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| 附录Ⅱ Tris-苷氨酸SDS-不连续系统不同浓度凝胶配制用量表 | 第92-93
页 |
| 附录Ⅲ 实验中部分克隆在M13测序引物间的序列 | 第93-94
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| 附录Ⅳ P1蛋白与HC-Pro蛋白氨基酸序列的比较 | 第94-95
页 |
| 附录Ⅴ 缩略词 | 第95-96
页 |
| 作者简历 | 第96页 |
