论文目录 | |
| 英文缩写 | 第1-7
页 |
| 中文摘要 | 第7-11
页 |
| 英文摘要 | 第11-16
页 |
| 正文 | 第16-82
页 |
| 前言 | 第16-19
页 |
| 第一部分 ATP合酶在神经细胞质膜表面的鉴定 | 第19-32
页 |
| 材料与方法 | 第19-25
页 |
| 1. 材料 | 第19-20
页 |
| · 实验动物 | 第19
页 |
| · 主要药品及试剂 | 第19
页 |
| · 主要仪器 | 第19-20
页 |
| 2.主要溶液配制 | 第20-21
页 |
| 3.实验方法 | 第21-24
页 |
| · 细胞膜组份提取 | 第21-22
页 |
| · 线粒体提取 | 第22
页 |
| · 筏区提取 | 第22
页 |
| · 电镜鉴定 | 第22-23
页 |
| · 流式细胞术 | 第23
页 |
| · 考马斯亮蓝法蛋白定量 | 第23-24
页 |
| · Western Blot 免疫印迹 | 第24
页 |
| 4.统计分析 | 第24-25
页 |
| 实验结果 | 第25-31
页 |
| 1 蔗糖梯度分离的亚细胞器的电镜鉴定 | 第25
页 |
| 2 ATP合酶在脑组织细胞膜的分布情况 | 第25-26
页 |
| 3 流式细胞标记术进一步鉴定在脑细胞膜上ATP合酶的存在 | 第26
页 |
| 4 蔗糖梯度离心所分离的筏区与ATP合酶的关系 | 第26-31
页 |
| 小结 | 第31-32
页 |
| 第二部分 ATP合酶在神经元质膜的鉴定 | 第32-55
页 |
| 材料与方法 | 第32-40
页 |
| 1.材料 | 第32-33
页 |
| · 实验动物 | 第32
页 |
| · 主要药品及试剂 | 第32
页 |
| · 主要仪器 | 第32-33
页 |
| 2.主要溶液配制 | 第33-34
页 |
| 3.实验方法 | 第34-39
页 |
| · 细胞培养 | 第34-35
页 |
| · 原代培养神经元β-tubulin IsotypeⅢ抗体免疫细胞化学标记 | 第35
页 |
| · 活细胞线粒体Mitotracker与ATP synthase α双重染色 | 第35-36
页 |
| · 外源性地转染线粒体Mito基因与ATPsynthase α双重染色(SH-SY5Y) | 第36-37
页 |
| · 细胞筏区标记CTB与ATPsynthase α双重染色 | 第37
页 |
| · 细胞表面生物素化标记 | 第37-38
页 |
| · 细胞表面ATP生成的测定 | 第38
页 |
| · 细胞表面ADP生成的测定 | 第38-39
页 |
| · 细胞内pH测定 | 第39
页 |
| · Calcein释放实验 | 第39
页 |
| 4.统计分析 | 第39-40
页 |
| 实验结果 | 第40-54
页 |
| 1 原代培养神经元的免疫细胞化学鉴定 | 第40
页 |
| 2 ATP合酶亚单位在原代培养神经元上的鉴定 | 第40-41
页 |
| 3 活细胞线粒体Mitotracker与ATP合酶双重染色 | 第41-42
页 |
| 4 ATP合酶与神经细胞脂筏的关系 | 第42-43
页 |
| 5 原代神经元表面ATP合酶功能的测定 | 第43-54
页 |
| · 细胞表面ATP合酶合成ATP分析 | 第43
页 |
| · 在不同浓度的寡霉素作用下细胞外ATP生成情况 | 第43
页 |
| · 在不同浓度的ATP合酶抗体作用下细胞外ATP生成情况 | 第43-44
页 |
| · 细胞质膜ATP合酶的水解功能分析 | 第44
页 |
| · 在细胞外酸性条件下细胞质膜ATP合酶调节pH的情况 | 第44
页 |
| · 在细胞外碱性条件下细胞质膜ATP合酶调节pH的情况 | 第44-45
页 |
| · 在细胞外碱性条件下细胞质膜ATP合酶调节calcein释放情况 | 第45-54
页 |
| 小结 | 第54-55
页 |
| 第三部分 Aβ与神经元质膜TAP合酶 | 第55-76
页 |
| 实验材料与方法 | 第55-61
页 |
| 1 材料 | 第55-56
页 |
| · 实验动物 | 第55
页 |
| · 实验试剂 | 第55
页 |
| · 主要仪器 | 第55-56
页 |
| 2 主要溶液配制 | 第56-57
页 |
| 3 方法 | 第57-60
页 |
| · 冰冻脑组织切片的制备 | 第57
页 |
| · Affi-gel 10 结合有Aβ与膜提取物的结合 | 第57-58
页 |
| · 液相色谱-电离子喷雾-串连质谱(LC-ESI-MS/MS)技术分析与Aβ结合的膜成分 | 第58
页 |
| · 脑组织切片4G8抗体和ATP合酶抗体免疫双标 | 第58-59
页 |
| · 纤维状Aβ的制备 | 第59
页 |
| · 细胞表面生物素化标记和Western blot | 第59
页 |
| · 细胞外ATP生成的测定 | 第59
页 |
| · 细胞内pH的测定 | 第59
页 |
| · LDH的测定 | 第59-60
页 |
| · Calcein释放实验 | 第60
页 |
| 4 Western印迹蛋白条带积分光密度分析 | 第60
页 |
| 5 统计分析 | 第60-61
页 |
| 实验结果 | 第61-75
页 |
| 1 Aβ与ATP合酶相互作用 | 第61
页 |
| 2 在转基因鼠的鉴定 | 第61
页 |
| 3 在转基因鼠脑片上Aβ与ATP合酶α亚单位的共存情况 | 第61-62
页 |
| 4 Aβ对原代神经元表面ATP合酶分布的影响 | 第62-63
页 |
| 5 Aβ对神经元表面ATP合酶的功能影响和Aβ对神经元表面ATP合酶合成ATP的影响 | 第63
页 |
| 6 Aβ对原代神经元细胞内pH值的调节 | 第63-64
页 |
| 7 细胞外碱性条件下Aβ调节LDH释放情况 | 第64
页 |
| 8 细胞外碱性条件下Aβ调节calcein释放情况 | 第64-75
页 |
| 小结 | 第75-76
页 |
| 讨论 | 第76-82
页 |
| 参考文献 | 第82-90
页 |
| 综述 | 第90-102
页 |
| 博士研究生期间发表及完成的论文 | 第102-103
页 |
| 致谢 | 第103-104
页 |
