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结缕草GA20氧化酶基因的克隆及遗传转化研究
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结缕草GA20氧化酶基因的克隆及遗传转化研究
论文目录
 
摘要第1-6 页
ABSTRACT第6-8 页
目录第8-11 页
缩略词第11-13 页
第一章 综述第13-38 页
　　· 关于赤霉素国内外研究进展第13-26 页
　　　　· 赤霉素的生物合成及关键酶研究进展第13-17 页
　　　　· GA与外界环境的关系第17-18 页
　　　　· GA促进植物生长的机理第18-19 页
　　　　· 与GA相关的矮化突变体研究进展第19-24 页
　　　　· GA20氧化酶研究进展第24-25 页
　　　　· 赤霉素在草坪草育种中的应用前景第25-26 页
　　· 分子生物学技术在草坪草中的应用第26-35 页
　　　　· 基因克隆技术在草坪草育种中的应用第26-27 页
　　　　· 植物基因分离的的策略第27-30 页
　　　　· 转基因技术在草坪草育种上的应用第30-35 页
　　· 本研究的意义、内容与技术路线第35-38 页
　　　　· 研究背景、目的、意义第35-36 页
　　　　· 研究的内容第36-37 页
　　　　· 技术路线第37-38 页
第二章 GA20氧化酶基因的克隆第38-58 页
　　· 材料第38 页
　　　　· 植物材料第38 页
　　　　· 菌株及质粒第38 页
　　　　· 酶及生化试剂第38 页
　　· 试验方法第38-47 页
　　　　· 总RNA的提取第38-39 页
　　　　· 反转录第39-40 页
　　　　· 感受态细胞的制备第40-41 页
　　　　· 目的基因片段的获得第41-47 页
　　· 结果与分析第47-54 页
　　　　· RNA的提取与反转录第47-48 页
　　　　· 中间片段的克隆第48-49 页
　　　　· GA20氧化酶基因3’端片段的分离第49-50 页
　　　　· GA20氧化酶基因5’端片段的分离第50-52 页
　　　　· 全长基因的克隆第52-54 页
　　· 讨论第54-57 页
　　　　· RACE方法的使用第54-55 页
　　　　· RNA提取第55 页
　　　　· 反转录的完整性第55 页
　　　　· 引物设计第55-57 页
　　　　· PCR第57 页
　　· 小结第57-58 页
第三章 GA20氧化酶基因在原核细胞中的表达第58-66 页
　　· 材料第58-59 页
　　　　· 常用生化试剂第58 页
　　　　· 菌种和质粒第58 页
　　　　· SDS-PAGE所需试剂第58-59 页
　　· 方法第59-61 页
　　　　· 原核表达载体的构建第59-60 页
　　　　· 融合蛋白pET-30a-GA20的诱导表达第60 页
　　　　· SDS-PAGE电泳第60-61 页
　　· 结果与分析第61-64 页
　　　　· 原核表达载体构建第61 页
　　　　· GA20氧化酶基因原核表达载体的鉴定第61-64 页
　　· 讨论第64-65 页
　　· 小结第65-66 页
第四章 GA20氧化酶基因在烟草中表达第66-85 页
　　· 材料第66 页
　　　　· 载体和菌种第66 页
　　　　· 试剂第66 页
　　· 方法第66-74 页
　　　　· 适合于双子叶植物的GA20氧化酶基因的正、反义表达载体第66-67 页
　　　　· 根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备、转化第67-68 页
　　　　· 农杆菌介导法转化烟草第68-69 页
　　　　· 转基因烟草的分子鉴定第69-74 页
　　· 结果与分析第74-83 页
　　　　· 植物表达载体pC35S1303GA20正义和反义表达载体的构建第74-78 页
　　　　· GA20氧化酶基因的正义和反义基因在烟草中的表达第78-83 页
　　· 讨论第83-84 页
　　　　· 农杆菌介导法转化烟草第83 页
　　　　· 植物DNA提取的方法第83 页
　　　　· Southern杂交需要注意的问题第83-84 页
　　· 小结第84-85 页
第五章 GA20氧化酶基因在高羊茅和结缕草中表达第85-101 页
　　· 植物材料第85 页
　　· 方法第85-90 页
　　　　· 适合于单子叶植物的正义和反义表达载体构建第85-86 页
　　　　· 外植体的获得第86-87 页
　　　　· 遗传转化第87-88 页
　　　　· GUS基因表达第88-89 页
　　　　· 转化植株的筛选再生第89 页
　　　　· 抗性植株的分子检测第89-90 页
　　　　· 对转化植株进行田间管理第90 页
　　· 结果与分析第90-98 页
　　　　· 植物正义和反义表达载体pC1303GA20的构建第90-93 页
　　　　· Gus基因的表达检测第93 页
　　　　· 抗性植株的获得第93 页
　　　　· 抗性植株的分子检测第93-98 页
　　· 讨论第98-100 页
　　　　· 两个草种的再生体系第98 页
　　　　· 结缕草植物总DNA的提取第98-99 页
　　　　· PCR中出现的问题第99-100 页
　　· 小结第100-101 页
第六章 讨论与结论第101-105 页
　　· 讨论第101-103 页
　　　　· 克隆GA20氧化酶基因的方法第101 页
　　　　· 结缕草GA20氧化酶基因第101-102 页
　　　　· 转基因植株的表型第102-103 页
　　　　· 拟进一步开展的工作第103 页
　　· 结论第103-105 页
　　　　· 结缕草中克隆GA20氧化酶基因第103 页
　　　　· GA20氧化酶基因在大肠杆菌中表达第103-104 页
　　　　· GA20氧化酶基因在烟草中表达第104 页
　　　　· GA20氧化酶基因在结缕草和高羊茅中表达第104-105 页
参考文献第105-119 页
附图Ⅰ第119-120 页
附图Ⅱ第120-121 页
附图Ⅱ第121-123 页
附图Ⅲ第123-124 页
附图Ⅳ第124-125 页
附图Ⅴ第125-126 页
个人简介第126-127 页
导师简介第127-128 页
获得成果目录清单第128-129 页
致谢第129页

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