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脱落酸（ABA）结合蛋白基因克隆、表达及其产物对ABA的特异结合
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脱落酸（ABA）结合蛋白基因克隆、表达及其产物对ABA的特异结合
论文目录
 
第一章 绪论第13-27 页
　　· 研究目的和意义第13-14 页
　　· 国内外研究进展第14-26 页
　　　　· 脱落酸研究进展第14-18 页
　　　　· RACE技术研究进展第18-21 页
　　　　· 酵母表达系统研究进展第21-26 页
　　· 研究内容和方法第26-27 页
第二章 脱落酸结合蛋白基因全长cDNA克隆第27-45 页
　　· 材料第27-28 页
　　　　· 试材第27 页
　　　　· 主要化学试剂与仪器第27-28 页
　　· 方法第28-36 页
　　　　· 材料的获取第28 页
　　　　· 总RNA提取第28-29 页
　　　　· RNA产率和质量鉴定第29-30 页
　　　　· mRNA纯化第30 页
　　　　· RACE扩增第30-32 页
　　　　　　· RACE cDNA模板合成第30-31 页
　　　　　　· PCR-RACE第31-32 页
　　　　· 琼脂糖凝胶纯化特异DNA片段第32-33 页
　　　　· 目的DNA片段的克隆及鉴定第33-36 页
　　　　　　· 目的DNA片段与pGEM-T Vector连接第33 页
　　　　　　· 重组质粒转化筛选第33-34 页
　　　　　　· 质粒提取第34-35 页
　　　　　　· 质粒酶切鉴定第35-36 页
　　· 结果与分析第36-43 页
　　　　· 总RNA的提取及鉴定第36-37 页
　　　　· 简并引物3′-RACE扩增第37 页
　　　　· 简并引物扩增片段重组质粒的构建和鉴定第37-39 页
　　　　· 简并引物扩增片段序列分析第39 页
　　　　· 特异引物3′-RACE及其产物的克隆、酶切鉴定和测序分析第39-40 页
　　　　· 5′-RACE扩增及其产物的克隆、酶切鉴定第40-42 页
　　　　· 5′-RACE扩增片段序列分析第42 页
　　　　· 3′／5′-RACE扩增片段拼接及其全序列分析第42-43 页
　　· 讨论第43-45 页
第三章 脱落酸结合蛋白基因在甲醇酵母中的高效表达和鉴定第45-65 页
　　· 材料第45-48 页
　　　　· 主要化学试剂第45 页
　　　　· 常用溶液的配置第45-47 页
　　　　· 主要仪器设备第47-48 页
　　· 方法第48-54 页
　　　　· 编码区基因片段的扩增、克隆及鉴定第48-50 页
　　　　　　· 编码区基因片段的扩增第48 页
　　　　　　· 琼脂糖凝胶纯化特异DNA片段第48-49 页
　　　　　　· 目的DNA片段的克隆第49 页
　　　　　　· 质粒提取及质粒酶切鉴定第49-50 页
　　　　· 表达载体的构建第50 页
　　　　· 酵母感受态细胞的制备及LiCI转化第50 页
　　　　· 小量表达第50-51 页
　　　　· 分析表达第51 页
　　　　· 大量表达及蛋白纯化第51-52 页
　　　　　　· 亲和层析ProBond柱子的准备第51-52 页
　　　　　　· 大量表达及蛋白纯化第52 页
　　　　· SDS-PAGE第52-53 页
　　　　· 可溶性蛋白含量的测定第53 页
　　　　· 纯化蛋白结合活性的测定第53 页
　　　　· 纯化蛋白动力学常数的测定第53-54 页
　　· 结果与分析第54-61 页
　　　　· 重组表达载体的构建第54-56 页
　　　　· 重组表达质粒转化甲醇酵母及转化体的筛选第56 页
　　　　· 重组蛋白的表达和纯化第56-60 页
　　　　· 纯化蛋白结合活性的测定第60 页
　　　　· 纯化蛋白动力学常数的测定第60-61 页
　　· 讨论第61-65 页
　　　　· 外源基因在甲醇酵母中高效表达影响因素的分析第61-63 页
　　　　· 基于ABP3400 cDNA编码蛋白质的亲疏水性及结构特点的预测分析第63-65 页
第四章 结论和建议第65-66 页
参考文献第66-74 页
致谢第74-75 页
个人简介第75页

本篇论文共75页，点击这进入下载页面。
 
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