论文目录 | |
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-21页 |
| 第一章 前言 | 第21-110页 |
| 第一节 细胞骨架概述 | 第21-29页 |
| · 细胞骨架的结构和组成 | 第21-23页 |
| · 活跃的网络 | 第23-26页 |
| · 自我组装拓扑结构 | 第26-28页 |
| · 细胞的运输系统 | 第28-29页 |
| 第二节 微管网络 | 第29-58页 |
| · 微管的结构与组装 | 第30-34页 |
| · 微管组织中心 | 第34-47页 |
| · 微管蛋白 | 第47-58页 |
| 第三节 微管相关蛋白 | 第58-77页 |
| · 微管相关蛋白概述 | 第58-64页 |
| · 微管结合蛋白的分类和功能 | 第64-77页 |
| 第四节 微管的动态性 | 第77-95页 |
| · 微管的动态不稳定性和踏车现象 | 第77-79页 |
| · 活细胞内的微管动力学分析 | 第79-80页 |
| · 细胞内微管动力学的调节 | 第80-82页 |
| · 微管蛋白折叠和同型复合物的调控 | 第82-83页 |
| · 依赖于微管动力学的细胞功能 | 第83-95页 |
| 第五节 中心体 | 第95-106页 |
| · 中心体的结构 | 第96-99页 |
| · 中心体的复制 | 第99-102页 |
| · 中心体的功能 | 第102-106页 |
| 第六节 本课题的研究意义 | 第106-110页 |
| 第二章 Mdp3 调节微管的结构特性 | 第110-181页 |
| 第一节 材料与方法 | 第111-154页 |
| · 细胞系 | 第111-112页 |
| · 菌株 | 第112页 |
| · 抗体 | 第112-113页 |
| · 药物 | 第113-114页 |
| · 其它试剂、工具酶及耗材 | 第114-115页 |
| · 常用溶液配方 | 第115-120页 |
| · 本章用到的质粒 | 第120-121页 |
| · 质粒构建 | 第121-126页 |
| · 重组蛋白小量诱导表达实验 | 第126-127页 |
| · His 重组蛋白表达纯化 | 第127-131页 |
| · 克隆抗体的制备 | 第131-132页 |
| · MBP 融合蛋白的表达及纯化 | 第132-134页 |
| · 质粒提取与转染 | 第134-136页 |
| · GST pull-down 实验 | 第136-137页 |
| · MBP pull-down 实验 | 第137-138页 |
| · γ-tubulin 蛋白的体外转录翻译 | 第138-139页 |
| · 微管共沉淀实验 | 第139-140页 |
| · siRNA 的转染 | 第140-141页 |
| · 微管混浊度实验 | 第141-142页 |
| · 免疫印迹分析 Western Blotting | 第142-143页 |
| · 免疫荧光显微分析 | 第143-145页 |
| · 细胞内微管解聚再生实验 | 第145-146页 |
| · 测量再生微管的荧光强度 | 第146页 |
| · 细胞同步化 | 第146-150页 |
| · 小鼠组织样品的 RNA 提取 | 第150-152页 |
| · 细胞及组织中 Mdp3 mRNA 水平检测 | 第152-153页 |
| · 统计学分析 | 第153-154页 |
| 第二节 结果与分析 | 第154-181页 |
| · Mdp3 与微管蛋白和微管间存在相互作用 | 第154-162页 |
| · Mdp3 在细胞内及体外与γ-tubulin 相互作用 | 第162-165页 |
| · Mdp3 在细胞内和体外促进微管聚合 | 第165-172页 |
| · Mdp3 在细胞内和体外增强微管的稳定性 | 第172-178页 |
| · Mdp3 在细胞周期和不同组织中的表达 | 第178-181页 |
| 第三章 Mdp3 的功能结构域 | 第181-201页 |
| 第一节 材料与方法 | 第181-189页 |
| · 细胞系 | 第181-182页 |
| · 菌株 | 第182页 |
| · 主要试剂 | 第182页 |
| · 本章用到的质粒 | 第182-184页 |
| · 质粒构建 | 第184-186页 |
| · 质粒提取与转染 | 第186页 |
| · GST pull-down 实验 | 第186页 |
| · MBP 融合蛋白的小量诱导表达 | 第186页 |
| · MBP 融合蛋白纯化和 MBP pull-down 实验 | 第186-187页 |
| · 细胞内微管再生实验 | 第187-188页 |
| · 免疫印迹分析和免疫荧光显微分析 | 第188页 |
| · 荧光分析微管体外聚合实验 | 第188-189页 |
| 第二节 结果与分析 | 第189-201页 |
| · Coiled coil 结构域介导 Mdp3 与细胞内微管蛋白及微管相互作用 | 第189-193页 |
| · Coiled coil 结构域介导体外 Mdp3 与微管蛋白相互作用 | 第193-196页 |
| · Mdp3-N（CCs+L）在细胞内和体外增强微管的稳定性107 | 第196-199页 |
| · Mdp3-N 在体外促进微管聚合 | 第199-201页 |
| 第四章 讨论 | 第201-209页 |
| 第一节 Mdp3 是一个新的微管结合蛋白 | 第201-202页 |
| 第二节 Mdp3 通过 coiled coil 结构域与微管相互作用 | 第202-203页 |
| 第三节 Mdp3 在细胞内和体外调节微管稳定性 | 第203-205页 |
| 第四节 Mdp3 在细胞周期和不同组织中表达水平存在差异 | 第205-206页 |
| 第五节 Mdp3 能够与中心体蛋白相互作用 | 第206-209页 |
| 第五章 Dimethylenastron 抑制人胰腺癌细胞运动 | 第209-227页 |
| 第一节 材料与方法 | 第209-215页 |
| · 主要试剂 | 第209-210页 |
| · 细胞培养 | 第210页 |
| · 体外细胞增殖实验 | 第210-211页 |
| · 划痕愈合实验 | 第211-212页 |
| · Transwell 实验 | 第212-213页 |
| · 分子模型（建模） | 第213-214页 |
| · ADP 释放率的测定 | 第214页 |
| · 微管的制备 | 第214-215页 |
| · 免疫荧光显微分析 | 第215页 |
| · 统计学分析 | 第215页 |
| 第二节 结果 | 第215-223页 |
| · 胰腺癌细胞株中 Eg5 表达上调 | 第215-217页 |
| · 抑制 Eg5 的活性可以抑制胰腺癌细胞的迁移 | 第217-218页 |
| · Dimethylenastron 抑制胰腺癌细胞的侵袭 | 第218-220页 |
| · Dimethylenastron 呈浓度依赖性抑制胰腺癌细胞增殖122 | 第220-221页 |
| · Dimethylenastron 变构抑制 Eg5 ATP 酶的马达域 | 第221-223页 |
| 第三节 讨论 | 第223-227页 |
| 第六章 结论与展望 | 第227-232页 |
| 第一节 结论 | 第227-228页 |
| 第二节 展望 | 第228-232页 |
| 参考文献 | 第232-304页 |
| 致谢 | 第304-308页 |
| 个人简历 在学期间发表的学术论文及研究成果 | 第308-311
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