共表达β-1,3-1,4-葡聚糖酶和β-1,4-木聚糖酶重组酿酒酵母的构建及其性能的应用研究 |
论文目录 | | | 目录 | 第1-15页 | | 摘要 | 第15-17页 | | Abstract | 第17-19页 | | 名词缩写表 | 第19-21页 | | 第一章 文献综述 | 第21-52页 | | 1 前言 | 第21页 | | 2 啤酒酿造的原辅料及特性 | 第21-25页 | | · 啤酒酿造的主要原料—大麦 | 第21-23页 | | · 啤洒酿造的辅助原料 | 第23-24页 | | · 大麦和麦芽中与啤酒酿造有关的酶类 | 第24-25页 | | 3 啤酒酿造工艺 | 第25页 | | · 原料粉碎 | 第25页 | | · 糖化 | 第25页 | | · 发酵 | 第25页 | | · 后酵 | 第25页 | | · 过滤 | 第25页 | | 4 啤酒过滤技术 | 第25-27页 | | · 硅藻土过滤法 | 第26页 | | · 膜过滤技术 | 第26-27页 | | · 错流微过滤技术 | 第27页 | | 5 啤酒过滤问题产生的原因及解决措施 | 第27-32页 | | · 啤酒过滤问题产生的原因 | 第27-30页 | | · 解决啤酒过滤困难的措施 | 第30-32页 | | 6 β-1,3-1,4-葡聚糖酶的研究进展 | 第32-38页 | | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶的来源 | 第32-33页 | | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酶学性质 | 第33-34页 | | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶的克隆表达和热稳定性研究 | 第34-35页 | | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶的检测方法 | 第35-37页 | | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶的应用 | 第37-38页 | | 7 β-1,4-木聚糖酶的研究进展 | 第38-45页 | | · β-1,4-木聚糖酶的来源 | 第39-40页 | | · β-1,4-木聚糖酶的酶学性质 | 第40页 | | · β-1,4-木聚糖酶的克隆表达 | 第40-42页 | | · β-1,4-木聚糖酶的检测方法 | 第42页 | | · β-·-木聚糖酶的应用 | 第42-45页 | | 8 酿酒酵母展示表达系统 | 第45-50页 | | · 酿酒酵母细胞表面展示表达系统的构成及原理 | 第45-46页 | | · 常用酿酒酵母展示表达系统 | 第46-48页 | | · 酿酒酵母细胞表面展示表达系统的应用 | 第48-50页 | | · 酿洒酵母细胞表面展示表达系统的缺陷 | 第50页 | | 9 选题背景和研究思路 | 第50-52页 | | 第二章 分泌型表达β-1,3-1,4-葡聚糖酶和β-1,4-木聚糖酶重组酵母的构建 | 第52-83页 | | 1 材料与仪器 | 第53-55页 | | · 菌株和质粒 | 第53-54页 | | · 引物 | 第54页 | | · 主要试剂 | 第54页 | | · 培养基 | 第54-55页 | | · 主要仪器设备 | 第55页 | | 2 实验方法 | 第55-64页 | | · 密码子优化和基因合成 | 第55页 | | · PCR反应条件 | 第55-56页 | | · PCR产物纯化 | 第56-57页 | | · DNA片段的酶切与连接 | 第57页 | | · 琼脂糖凝胶电泳 | 第57-58页 | | · 大肠杆菌质粒提取 | 第58-59页 | | · 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第59页 | | · 质粒转化大肠杆菌宿主 | 第59-60页 | | · 基因测序 | 第60页 | | · 酵母基因组DNA提取 | 第60页 | | · 酿酒酵母的感受态制备和质粒的电击转化 | 第60-61页 | | · 重组酵母的筛选及PCR检测 | 第61-62页 | | · 酵母分泌表达载体的构建过程 | 第62-63页 | | · 透明圈实验 | 第63页 | | · β-1,4-木聚糖酶活力的测定 | 第63页 | | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶活力的测定 | 第63-64页 | | 3 结果与分析 | 第64-79页 | | · β-1,4-木聚糖酶基因的优化和合成 | 第64-65页 | | · β-1,4-木聚糖酶基因的扩增 | 第65-66页 | | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的扩增 | 第66-67页 | | · PGK1启动子基因的扩增 | 第67-68页 | | · MFα1基因的扩增 | 第68-69页 | | · PGK1-MFα1基因的连接和扩增 | 第69-70页 | | · ADH1终止子基因的扩增 | 第70-71页 | | · KanMX的扩增 | 第71-72页 | | · PGK1-MFα1的克隆 | 第72页 | | · ADH1终止子基因的克隆 | 第72-73页 | | · KanMX的克隆 | 第73-74页 | | · β-1,4-木聚糖酶基因的克隆 | 第74-75页 | | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的克隆 | 第75-76页 | | · 分泌表达β-1,4-木聚糖酶的酿酒酵母基因工程菌的构建 | 第76-77页 | | · 分泌表达β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酿酒酵母基因工程菌的构建 | 第77页 | | · 共表达β-1,4-木聚糖酶和β-1,3-1,4-葡聚糖酶酿酒酵母基因工程菌的构建 | 第77-78页 | | · β-1,4-木聚糖酶和β-1,3-1,4-葡聚塘酶的分泌表达 | 第78-79页 | | 4 讨论与小结 | 第79-83页 | | · 讨论 | 第79-80页 | | · 小结 | 第80-83页 | | 第三章 组成型展示表达β-1,3-1,4-葡聚糖酶和β-1,4-木聚糖酶重组酵母的构建 | 第83-101页 | | 1 材料与仪器 | 第84-85页 | | · 菌株和质粒 | 第84页 | | · 引物 | 第84页 | | · 主要试剂 | 第84-85页 | | · 培养基 | 第85页 | | · 主要仪器设备 | 第85页 | | 2 实验方法 | 第85-89页 | | · PCR反应条件 | 第85-86页 | | · PCR产物纯化 | 第86页 | | · DNA片段的酶切与连接 | 第86页 | | · 琼脂糖凝胶电泳 | 第86页 | | · 大肠杆菌质粒提取 | 第86页 | | · 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第86页 | | · 质粒转化大肠杆菌宿主 | 第86页 | | · 基因测序 | 第86页 | | · 酵母基因组DNA提取 | 第86页 | | · 酿酒酵母的感受态制备和质粒的电击转化 | 第86页 | | · 重组酵母的筛选及PCR检测 | 第86-87页 | | · 酵母展示表达载体的构建过程 | 第87页 | | · 透明圈实验 | 第87页 | | · 展示表达β-1,4-木聚糖酶活力的测定 | 第87-88页 | | · 展示表达β-1,3-1,4-葡聚糖酶活力的测定 | 第88页 | | · 酵母工程菌株细胞组分的制备 | 第88-89页 | | 3 结果与分析 | 第89-97页 | | · β-1,4-木聚糖酶基因的扩增 | 第89页 | | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的扩增 | 第89-90页 | | · α-agglutinin基因的扩增 | 第90-91页 | | · β-1,4-木聚糖酶基因的克隆 | 第91-92页 | | · α-agglutinin基因的克隆 | 第92-93页 | | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的克隆 | 第93-94页 | | · 展示表达β-1,4-木聚糖酶的酿酒酵母基因工程菌的构建 | 第94-95页 | | · 展示表达β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酿酒酵母基因工程菌的构建 | 第95页 | | · 共展示表达β-1,4-木聚糖酶和β-1,3-1,4-葡聚糖酶的重组酿酒酵母的构建 | 第95-96页 | | · β-1,4-木聚糖酶和β-1,3-1,4-葡聚糖酶在细胞表面的展示表达 | 第96-97页 | | 4 讨论与小结 | 第97-101页 | | · 讨论 | 第97-98页 | | · 小结 | 第98-101页 | | 第四章 诱导型展示表达β-1,3-1,4-葡聚糖酶和β-1,4-木聚糖酶重组酵母的构建 | 第101-114页 | | 1 材料与仪器 | 第101-103页 | | · 菌株和质粒 | 第101-102页 | | · 引物 | 第102页 | | · 主要试剂 | 第102页 | | · 培养基 | 第102-103页 | | · 主要仪器设备 | 第103页 | | 2 实验方法 | 第103-105页 | | · PCR反应条件 | 第103页 | | · PCR产物纯化 | 第103页 | | · DNA片段的酶切与连接 | 第103-104页 | | · 琼脂糖凝胶电泳 | 第104页 | | · 大肠杆菌质粒提取 | 第104页 | | · 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第104页 | | · 质粒转化大肠杆菌宿主 | 第104页 | | · 基因测序 | 第104页 | | · 酵母基因组DNA提取 | 第104页 | | · 酿酒酵母的感受态制备和质粒的电击转化 | 第104页 | | · 重组酵母的筛选及PCR检测 | 第104页 | | · 酵母展示表达载体的构建流 | 第104-105页 | | · 酵母基因工程菌诱导产酶方法 | 第105页 | | · 透明圈实验 | 第105页 | | · β-1,4-木聚糖酶活力的测定 | 第105页 | | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶活力的测定 | 第105页 | | · 酵母工程菌株细胞组分的制备 | 第105页 | | 3 结果与分析 | 第105-111页 | | · GAL1启动子基因的扩增 | 第105-106页 | | · 构建YEplac181-GMXAAK质粒 | 第106-107页 | | · 构建YEplac181-GMGAAK质粒 | 第107页 | | · 展示表达β-1,4-木聚糖酶酿酒酵母基因工程菌的构建 | 第107-108页 | | · 展示表达β-1,3-1,4-葡聚糖酶酿酒酵母基因工程菌的构建 | 第108-109页 | | · 共展示表达β-1,4-木聚糖酶和β-1,3-1,4-葡聚糖酶的重组酿酒酵母的构建 | 第109-110页 | | · 重组酿酒酵母展示表达β-1,4-木聚糖酶和β-1,3-1,4-葡聚墉酶 | 第110-111页 | | 4 讨论与小结 | 第111-114页 | | · 讨论 | 第111-112页 | | · 小结 | 第112-114页 | | 第五章 重组β-1,4-木聚糖酶和β-1,3-1,4-葡聚糖酶的性质 | 第114-125页 | | 1 材料与仪器 | 第114-115页 | | · 菌株 | 第114页 | | · 主要试剂 | 第114-115页 | | · 培养基 | 第115页 | | · 仪器设备 | 第115页 | | 2 实验方法 | 第115-117页 | | · β-1,4-木聚糖酶活力的测定 | 第115页 | | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶活力的测定 | 第115页 | | · 标准曲线制作 | 第115-116页 | | · 木聚糖酶和β-1,3-1,4-葡聚糖酶的表达 | 第116页 | | · 酵母细胞的收集 | 第116页 | | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶酶学性质研究 | 第116-117页 | | · β-1,4-木聚糖酶酶学性质研究 | 第117页 | | 3 结果与分析 | 第117-123页 | | · 重组内切β-1,3-1,4-葡聚糖酶的底物专一性 | 第117-118页 | | · 重组内切β-1,4-木聚糖酶的底物专一性 | 第118页 | | · β-1,4-木聚糖酶的最适反应温度 | 第118-119页 | | · β-1,4-木聚糖酶的热稳定性 | 第119页 | | · β-1,4-木聚糖酶的最适反应pH | 第119-120页 | | · β-1,4-木聚糖酶的pH稳定性 | 第120-121页 | | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶的最适反应温度 | 第121页 | | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶的热稳定性 | 第121-122页 | | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶的最适反应pH | 第122页 | | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶的pH稳定性 | 第122-123页 | | 4 讨论与小结 | 第123-125页 | | · 讨论 | 第123-124页 | | · 小结 | 第124-125页 | | 第六章 重组菌株的发酵性能 | 第125-137页 | | 1 材料与仪器 | 第125-126页 | | · 主要试剂 | 第125页 | | · 培养基 | 第125-126页 | | · 菌株 | 第126页 | | · 主要仪器与设备 | 第126页 | | 2 实验方法 | 第126-130页 | | · 生长曲线 | 第126-127页 | | · 发酵力试验 | 第127页 | | · 凝聚性试验 | 第127页 | | · 热死火温度试验 | 第127-128页 | | · 木聚糖含量与麦芽汁粘度的关系 | 第128页 | | · 葡聚糖含量与麦芽汁粘度的关系 | 第128-129页 | | · 酿酒酵母基因工程菌主发酵过程中分解木聚糖和葡聚糖的研究 | 第129-130页 | | 3 结果与分析 | 第130-135页 | | · 生长曲线 | 第130页 | | · 发酵性能 | 第130-131页 | | · 凝聚性 | 第131页 | | · 热死灭温度 | 第131页 | | · 麦芽汁粘度与β-葡聚糖含量的关系 | 第131-132页 | | · 麦芽汁粘度与与木聚糖含量的关系 | 第132-133页 | | · 木聚糖在啤酒主发酵过程中的降解 | 第133-134页 | | · 葡聚糖在啤酒主发酵过程中的降解 | 第134-135页 | | 4 讨论与小结 | 第135-137页 | | · 讨论 | 第135-136页 | | · 小结 | 第136-137页 | | 第七章 基因工程菌株酿酒试验 | 第137-141页 | | 1 材料与仪器 | 第137页 | | · 酵母菌株及原料 | 第137页 | | · 主要仪器 | 第137页 | | 2 实验方法 | 第137-139页 | | · 麦汁培养基的制备 | 第137页 | | · 啤酒酿造试验方法 | 第137-138页 | | · 理化指标和性能分析 | 第138-139页 | | 3 结果与分析 | 第139-140页 | | · 啤酒理化指标的测定结果 | 第139页 | | · 酵母菌性能测试 | 第139-140页 | | 4 讨论与小结 | 第140-141页 | | 第8章 结论与展望 | 第141-143页 | | 1 结论 | 第141-142页 | | · 具有降解木聚糖和葡聚糖的酿酒酵母基因工程菌的构建 | 第141页 | | · 重组酶的酶学性质 | 第141页 | | · 酿酒酵母基因工程菌的性能 | 第141-142页 | | 2 展望 | 第142-143页 | | 参考文献 | 第143-156页 | | 致谢 | 第156-157页 | | 作者简历 | 第157
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