论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-13页 |
| 英文摘要 | 第13-19页 |
| 第一部分 肺癌差异miRNA的筛选及验证 | 第19-44页 |
| 引言 | 第19-20页 |
| · 材料 | 第20-24页 |
| · 组织材料 | 第20-21页 |
| · 实验细胞 | 第21页 |
| · 主要实验仪器及器材 | 第21-23页 |
| · 主要实验试剂 | 第23-24页 |
| · 实验方法 | 第24-32页 |
| · 细胞培养 | 第24-25页 |
| · 检测miRNA表达谱系 | 第25-26页 |
| · miRNAs芯片制备 | 第26-29页 |
| · 采用Real-time PCR来验证miRNA-130a在肺癌姐织及正常肺组织中的表泣 | 第29-32页 |
| · 统计学分析 | 第32页 |
| · 结果 | 第32-39页 |
| · 细胞总RNA质检结果 | 第32-33页 |
| · miRNA芯片结果 | 第33页 |
| · miRNA芯片检测矩阵图 | 第33-36页 |
| · Real-time PCR检测肺癌组织miRNA-130a表达 | 第36-39页 |
| · 讨论 | 第39-41页 |
| 参考文献 | 第41-44页 |
| 第二部分 miR-130a在肺癌发病中的机制研究 | 第44-61页 |
| 引言 | 第44页 |
| · 材料 | 第44-45页 |
| · 细胞系 | 第44页 |
| · 实验动物 | 第44页 |
| · 主要实验试剂 | 第44页 |
| · 采用仪器 | 第44-45页 |
| · 方法 | 第45-50页 |
| · 细胞培养 | 第45页 |
| · 转染方法 | 第45-46页 |
| · 实时定量RT-PCR鉴定 | 第46页 |
| · CCK-8检测细胞生长曲线 | 第46页 |
| · EdU细胞增殖实验 | 第46-48页 |
| · 流式细胞术检测肺癌细胞周期 | 第48页 |
| · 克隆形成实验 | 第48-49页 |
| · 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第49页 |
| · Transwell实验(细胞迁移实验) | 第49页 |
| · 细胞侵袭实验 | 第49页 |
| · 裸鼠皮下成瘤实验 | 第49-50页 |
| · 统计学分析 | 第50页 |
| 3 结果 | 第50-57页 |
| · RT-PCR法检测各组细胞株中miR-130a表达 | 第50页 |
| · miR-130a对肺癌细胞增殖能力的影响 | 第50-51页 |
| · EdU实验结果显示 | 第51-52页 |
| · Transwell检测肺癌细胞侵袭转移能力 | 第52-53页 |
| · miR-130a诱导肺癌细胞凋亡 | 第53-54页 |
| · 软琼脂平板克隆形成实验证实miR-130a抑制肺癌细胞的生长增殖 | 第54-55页 |
| · miR-130a对肺癌细胞周期的影响 | 第55-56页 |
| · miR-130a对肺癌细胞系裸鼠皮下成瘤能力的影响 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-61页 |
| 第三部分 miRNA-130a在肺癌细胞中发挥生物机制的靶基因探究 | 第61-84页 |
| 引言 | 第61页 |
| · 材料 | 第61-62页 |
| · 细胞系、肺癌/癌旁组织 | 第61页 |
| · 主要试剂 | 第61-62页 |
| · 主要仪器 | 第62页 |
| · 方法 | 第62-70页 |
| · 靶基因预测 | 第62-63页 |
| · 细胞培养 | 第63页 |
| · western blotting检测蛋白表达 | 第63页 |
| · 实时定量RT-PCR法 | 第63-64页 |
| · miR-130a mimics及inhibitor细胞转染 | 第64页 |
| · RT-PCR检测GOLPH3 mRNA表达水平 | 第64页 |
| · 构建基因载体 | 第64-69页 |
| · 双荧光素酶报告系统检测microRNA、重组质粒转染293T细胞 | 第69页 |
| · GOLPH3真核表达载体构建与转染 | 第69-70页 |
| · CCK-8检测转染后细胞生长曲线 | 第70页 |
| · 统计学分析 | 第70页 |
| 3 结果 | 第70-77页 |
| · 预测由miR-130a直接调控的靶基因结果 | 第70页 |
| · 肺癌组织/癌旁组织以及肺癌细胞系/正常支气管上皮细胞系中的GOLPH3蛋白表达 | 第70-71页 |
| · miR-130a对GOLPH3蛋白及mRNA表达水平的影响 | 第71-72页 |
| · 质粒构建的鉴定 | 第72-73页 |
| · 双荧光素酶报告系统活性检测 | 第73-75页 |
| · GOLPH3介导miR-130a对肺癌细胞增殖的抑制作用 | 第75页 |
| · Western Blot检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达 | 第75-77页 |
| 4 讨论 | 第77-81页 |
| 小结 | 第81页 |
| 参考文献 | 第81-84页 |
| 第四部分 ：miRNA和肺癌的相关性进展综述 | 第84-97页 |
| 参考文献 | 第88-97页 |
| 附录 英文词汇缩略表 | 第97-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 博士在读期间工作小结 | 第100-101页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第101页 |
