论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 英文缩略词 | 第12-13页 |
| 第一章 研究背景综述 | 第13-42页 |
| 一、骨形态发生蛋白的研究进展 | 第14-26页 |
| 1.1 BMP的发现 | 第14页 |
| 1.2 BMP的结构 | 第14-17页 |
| 1.3 BMP成员的基因定位和mRNA分布 | 第17页 |
| 1.4 BMP的主要生物学功能——诱导成骨 | 第17-20页 |
| 1.4.1 骨诱导机制 | 第18页 |
| 1.4.2 BMP的来源 | 第18-19页 |
| 1.4.3 BMP的作用方式 | 第19页 |
| 1.4.4 BMP的量效关系 | 第19-20页 |
| 1.5 BMP信号通路及其调节 | 第20-24页 |
| 1.5.1 BMP信号通路 | 第20-22页 |
| 1.5.2 BMP信号通路的调节 | 第22-24页 |
| 1.6 BMP的其它生物学功能 | 第24页 |
| 1.7 BMP纯化方法研究进展 | 第24-25页 |
| 1.8 BMP的临床应用及载体材料 | 第25-26页 |
| 二、骨科概述 | 第26-32页 |
| 2.1 骨的构成 | 第26-28页 |
| 2.2 骨组织的形成及代谢 | 第28-30页 |
| 2.2.1 成骨方式 | 第28-30页 |
| 2.2.2 骨的代谢 | 第30页 |
| 2.3 骨质疏松症 | 第30-32页 |
| 参考文献 | 第32-42页 |
| 第二章 实验部分 | 第42-99页 |
| 第一节 中国地鼠卵巢细胞培养上清中重组骨形态发生蛋白2的三步纯化法 | 第43-81页 |
| 一、引言 | 第43-44页 |
| 二、材料和方法 | 第44-55页 |
| 2.1 实验材料 | 第44页 |
| 2.2 CHO细胞培养条件的简单优化 | 第44-46页 |
| 2.2.1 细胞生长曲线 | 第44页 |
| 2.2.2 培养温度对生长状态的影响 | 第44-45页 |
| 2.2.3 加入DSS对生长状态的影响 | 第45-46页 |
| 2.3 肝素亲和柱的制备 | 第46-49页 |
| 2.3.1 制备方法 | 第46-47页 |
| 2.3.2 两种制备方法的比较 | 第47-49页 |
| 2.4 肝素亲和纯化rhBMP-2粗品 | 第49-50页 |
| 2.5 Q-Sepharose阴离子交换层析富集rhBMP-2成熟二聚体 | 第50-51页 |
| 2.6 凝胶过滤分离rhBMP-2成熟二聚体 | 第51-52页 |
| 2.7 CHO培养上清中纯化rhBMP-2成熟二聚体的三步纯化法评估 | 第52-53页 |
| 2.7.1 三步纯化法 | 第52-53页 |
| 2.7.2 各组分总蛋白和rhBMP-2成熟二聚体的初步定量 | 第53页 |
| 2.7.3 成熟二聚体在各组分中的相对含量测定 | 第53页 |
| 2.8 rhBMP-2的生物活性测定 | 第53-55页 |
| 2.8.1 头部异位成骨实验 | 第53-54页 |
| 2.8.2 肌袋异位成骨实验 | 第54-55页 |
| 三、结果 | 第55-77页 |
| 3.1 CHO细胞培养条件的简单优化 | 第55-59页 |
| 3.1.1 细胞生长曲线 | 第55-56页 |
| 3.1.2 不同培养温度时细胞的生长状态 | 第56-57页 |
| 3.1.3 培养时加入DSS对细胞生长状态的影响 | 第57-59页 |
| 3.2 肝素亲和柱的制备 | 第59-62页 |
| 3.3 rhBMP-2粗品的肝素亲和纯化 | 第62-69页 |
| 3.4 Q-Sepharose阴离子交换层析对rhBMP-2成熟二聚体的富集 | 第69-72页 |
| 3.5 凝胶过滤分离rhBMP-2成熟二聚体 | 第72-73页 |
| 3.6 CHO培养上清中纯化rhBMP-2成熟二聚体的三步纯化法评估 | 第73-75页 |
| 3.7 rhBMP-2的生物活性测定 | 第75-77页 |
| 3.7.1 头部异位成骨实验 | 第75-76页 |
| 3.7.2 肌袋异位成骨实验 | 第76-77页 |
| 四、讨论 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-81页 |
| 第二节 多肽促成骨作用的初步研究 | 第81-99页 |
| 一、引言 | 第81-82页 |
| 二、材料和方法 | 第82-85页 |
| 2.1 实验材料 | 第82页 |
| 2.2 细胞培养和处理 | 第82-83页 |
| 2.3 蛋白定量 | 第83页 |
| 2.4 ALP含量检测 | 第83页 |
| 2.5 MC3T3-E1细胞矿化条件培养 | 第83-84页 |
| 2.6 细胞矿化茜素红染色检测 | 第84页 |
| 2.7 实验动物及处理 | 第84页 |
| 2.8 骨密度检测 | 第84页 |
| 2.9 数据统计分析 | 第84-85页 |
| 三、结果 | 第85-96页 |
| 3.1 Bp08不同变体及片段对成骨细胞ALP表达量的影响 | 第85-91页 |
| 3.2 Bp08对成骨细胞矿化的影响 | 第91页 |
| 3.3 Bp08对骨质疏松大鼠骨密度的影响 | 第91-96页 |
| 3.3.1 骨质疏松模型的建立 | 第91-92页 |
| 3.3.2 Bp08及其变体对骨质疏松大鼠股骨密度的影响 | 第92-94页 |
| 3.3.3 Bp08及其变体对骨质疏松大鼠腰椎骨密度的影响 | 第94-96页 |
| 四、讨论 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
