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拟南芥Casein Kinase Ⅱ参与茉莉酸信号调控的研究

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拟南芥Casein Kinase Ⅱ参与茉莉酸信号调控的研究
论文目录
 
本论文创新点第1-9页
摘要第9-11页
Abstract第11-13页
本论文缩略词表第13-15页
1 引言第15-37页
  1.1 JA信号途径第15-26页
    1.1.1 JA的合成途径第15页
    1.1.2 JA的信号转导途径第15-26页
  1.2 CK2介导的磷酸化信号第26-35页
    1.2.1 CK2的结构与特性第27-28页
    1.2.2 植物CK2研究概述第28-35页
  1.3 本研究的目的与意义第35-37页
2 材料与方法第37-64页
  2.1 植物材料和培养条件第37页
  2.2 基因组DNA提取第37-38页
  2.3 拟南芥总RNA的提取和反转录PCR第38-40页
    2.3.1 RNA的提取第38-39页
    2.3.2 反转录PCR第39-40页
    2.3.3 半定量PCR检测第40页
  2.4 载体构建及相关分子生物学方法第40-45页
    2.4.1 载体构建过程概述第40-41页
    2.4.2 质粒小量提取第41页
    2.4.3 DNA片段(凝胶)纯化回收第41-42页
    2.4.4 大肠杆菌的感受态细胞的制备及热激转化第42页
    2.4.5 农杆菌感受态细胞的制备及热激转化第42-43页
    2.4.6 农杆菌介导的拟南芥转化第43-44页
    2.4.7 pBI-EGFP转基因载体构建策略第44页
    2.4.8 点突变MYC2转基因载体构建策略第44-45页
  2.5 荧光定量PCR第45-46页
  2.6 GUS染色第46-47页
  2.7 酵母双杂交实验第47-49页
    2.7.1 研究中使用的酵母表达载体和酵母菌株第47页
    2.7.2 酵母融合表达质粒的构建第47-48页
    2.7.3 酵母转化第48页
    2.7.4 酵母融合第48-49页
  2.8 双分子荧光互补(BiFC)第49-51页
    2.8.1 BiFC实验相关质粒构建第49页
    2.8.2 基因枪介导的洋葱表皮转化第49-50页
    2.8.3 农杆菌介导的烟草叶片转化第50-51页
  2.9 激光扫描共聚焦显微镜观察GFP融合蛋白亚细胞定位第51页
  2.10 蛋白的表达和纯化第51-54页
    2.10.1 蛋白的诱导表达及纯化第51-52页
    2.10.2 SDS-PAGE胶制备及电泳第52-53页
    2.10.3 CK2激酶——底物实验第53-54页
  2.11 植物内源蛋白表达水平的检测第54-55页
    2.11.1 植物总蛋白的提取第54页
    2.11.2 Western B1ot第54-55页
  2.12 染色质免疫沉淀(ChIP)第55-59页
  2.13 表型分析以及数据统计第59页
  2.14 花青素的测定第59页
  2.15 根尖的显微观察第59-60页
  2.16 本研究中使用的引物第60-64页
    2.16.1 基因特异引物第60-62页
    2.16.2 MYC2点突变引物第62页
    2.16.3 载体构建和材料株系鉴定引物第62-64页
3 结果与分析第64-96页
  3.1 CK2调节亚基与MYC2的相互作用第64-67页
  3.2 MYC2是CK2的底物第67-68页
  3.3 TBB抑制JA信号应答反应第68-70页
  3.4 CK2mut中JA信号应答反应减弱第70-74页
  3.5 CKB4过量表达增强JA信号应答反应第74-76页
  3.6 CK2间接调控MYC2蛋白的积累第76-79页
  3.7 CK2促进MYC2对靶基因启动子的结合第79-83页
  3.8 Ser417、Ser420点突变对MYC2功能没有显著影响第83-84页
  3.9 CK2α亚基T-DNA突变体的鉴定第84-87页
  3.10 CKA4调控拟南芥幼苗的发育第87-91页
  3.11 CKA4调控拟南芥的开花时间第91-93页
  3.12 CKA4回复实验和亚细胞定位分析第93-95页
  3.13 CK2α亚基-DNA突变体对JA的敏感性第95-96页
4 讨论第96-104页
  4.1 CK2对JA信号的应答的调节作用第96-100页
    4.1.1 MYC2是CK2的底物第96-97页
    4.1.2 CK2促进JA信号的应答反应第97页
    4.1.3 CK2不影响MYC2的蛋白稳定性第97-98页
    4.1.4 CK2促进MYC2对其靶基因启动子的结合第98-99页
    4.1.5 MYC2蛋白内CK2特异的磷酸化位点第99页
    4.1.6 CK2活性的调控机制第99-100页
  4.2 CKA4的生物学功能第100-102页
    4.2.1 CKA4对拟南芥幼苗发育的调控第100-101页
    4.2.2 CKA4对开花时间的调控第101页
    4.2.3 CKA4与JA信号第101页
    4.2.4 CKA4的亚细胞定位第101-102页
  4.3 结论第102-104页
附章:低温下生长素和细胞分裂素信号途径对拟南芥根生长发育的调控第104-117页
1 引言第104-105页
2 材料与方法第105-107页
3 结果第107-115页
4 讨论第115-117页
参考文献第117-128页
在读期间发表及投稿论文第128-129页
致谢第129页

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