论文目录 | |
| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-43页 |
| 1.1 RNAi的概述 | 第15-21页 |
| 1.1.1 RNAi的历史 | 第15-16页 |
| 1.1.2 RNAi的机制 | 第16-18页 |
| 1.1.3 RNAi的效应 | 第18-21页 |
| 1.2 RNAi在昆虫学中的研究进展 | 第21-28页 |
| 1.2.1 昆虫细胞中的RNAi机制 | 第21-22页 |
| 1.2.2 RNAi在活体昆虫中的应用 | 第22-25页 |
| 1.2.3 RNAi在农业害虫防治中的应用 | 第25-27页 |
| 1.2.4 RNAi在昆虫疾病控制中的作用 | 第27-28页 |
| 1.2.5 问题和展望 | 第28页 |
| 1.3 RNA干扰脱靶效应的研究 | 第28-35页 |
| 1.3.1 脱靶效应的类型 | 第29-30页 |
| 1.3.2 降低脱靶效应的方法 | 第30-31页 |
| 1.3.3 脱靶效应的预测 | 第31-32页 |
| 1.3.4 脱靶效应在动物学中的研究进展 | 第32-34页 |
| 1.3.5 脱靶效应研究的发展和展望 | 第34-35页 |
| 1.4 赤拟谷盗的RNA干扰研究进展 | 第35-41页 |
| 1.4.1 赤拟谷盗是一种模式昆虫 | 第35页 |
| 1.4.2 赤拟谷盗功能基因组学研究进展 | 第35-38页 |
| 1.4.3 赤拟谷盗中系统性的RNAi | 第38-41页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第41-43页 |
| 第二章 赤拟谷盗中siRNA与dsRNA引发的RNAi效率比较 | 第43-63页 |
| 2.1 材料与方法 | 第44-56页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第44页 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器设备 | 第44-45页 |
| 2.1.3 赤拟谷盗基因片段的克隆 | 第45-49页 |
| 2.1.4 dsRNA的制备 | 第49-52页 |
| 2.1.5 siRNA的设计与合成 | 第52-53页 |
| 2.1.6 siRNA的与dsRNA的注射 | 第53页 |
| 2.1.7 赤拟谷盗RNAi沉默效应观察和数据统计方法 | 第53-56页 |
| 2.2 结果与分析 | 第56-60页 |
| 2.2.1 siRNA与dsRNA的干扰效果表型观察 | 第56-58页 |
| 2.2.2 注射siRNA或dsRNA对目标基因动态表达情况 | 第58-59页 |
| 2.2.3 不同siRNA和dsRNA沉默目标基因的干扰效率 | 第59-60页 |
| 2.3 讨论 | 第60-63页 |
| 第三章 赤拟谷盗中dsRNA引起的脱靶效应 | 第63-91页 |
| 3.1 材料与方法 | 第65-69页 |
| 3.1.1 供试昆虫 | 第65页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第65页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第65-66页 |
| 3.1.4 dsRNA的合成与制备 | 第66-67页 |
| 3.1.5 dsRNA的注射 | 第67页 |
| 3.1.6 用于微阵列芯片杂交所用RNA的制备 | 第67页 |
| 3.1.7 微阵列芯片杂交及其数据分析 | 第67-68页 |
| 3.1.8 生物信息学预测来自dsRNA的siRNA以及脱靶基因的搜寻 | 第68页 |
| 3.1.9 实时定量PCR(qRT-PCR)分析 | 第68-69页 |
| 3.2 结果与分析 | 第69-88页 |
| 3.2.1 dsChi1与dsChi2的基因沉默效果比较 | 第69-70页 |
| 3.2.2 微阵列芯片结果概况 | 第70-73页 |
| 3.2.3 RNAi沉默非靶标基因的功能分析 | 第73-76页 |
| 3.2.4 序列特异性脱靶效应的鉴定 | 第76-80页 |
| 3.2.5 识别非序列特异性脱靶现象 | 第80-87页 |
| 3.2.6 微阵列芯片结果的验证 | 第87-88页 |
| 3.3 讨论 | 第88-91页 |
| 第四章 预测软件dsCheck对dsRNA脱靶效应的预测 | 第91-105页 |
| 4.1 材料与方法 | 第92-96页 |
| 4.1.1 供试昆虫和细胞 | 第92页 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器设备 | 第92-93页 |
| 4.1.3 dsRNA的合成与制备 | 第93页 |
| 4.1.4 dsRNA的注射 | 第93-94页 |
| 4.1.5 dsCheck预测dsRNA的脱靶基因 | 第94页 |
| 4.1.6 实时定量PCR(qRT-PCR)分析dsCheck预测结果 | 第94-96页 |
| 4.2 结果与分析 | 第96-102页 |
| 4.2.1 dsCheck软件在赤拟谷盗中预测2个dsRNA的脱靶状况 | 第96-97页 |
| 4.2.2 dsCheck软件预测果蝇活体和组培细胞中的dsRNA脱靶状况 | 第97-101页 |
| 4.2.3 果蝇活体RNAi脱靶效应的检测 | 第101页 |
| 4.2.4 果蝇S2细胞RNAi脱靶效应的检测 | 第101-102页 |
| 4.3 讨论 | 第102-105页 |
| 第五章 影响dsRNA脱靶效应的分子特征 | 第105-123页 |
| 5.1 材料与方法 | 第106-116页 |
| 5.1.1 供试昆虫 | 第106页 |
| 5.1.2 主要试剂和仪器设备 | 第106-107页 |
| 5.1.3 dsRNA的制备 | 第107-110页 |
| 5.1.4 siRNA的设计与合成 | 第110-111页 |
| 5.1.5 siRNA的与dsRNA的注射 | 第111页 |
| 5.1.6 dsRNA序列与mRNA的相似性检测 | 第111-114页 |
| 5.1.7 赤拟谷盗RNAi沉默效应观察 | 第114-116页 |
| 5.2 结果与分析 | 第116-120页 |
| 5.2.1 脱靶效应与dsRNA序列的总体相似性 | 第116-117页 |
| 5.2.2 dsRNA的长度影响RNAi效率 | 第117-118页 |
| 5.2.3 dsRNA与mRNA连续匹配片段与脱靶效应的关系 | 第118-120页 |
| 5.3 讨论 | 第120-123页 |
| 第六章 赤拟谷盗RNAi过程中非序列特异性脱靶效应的探索 | 第123-131页 |
| 6.1 材料与方法 | 第124-127页 |
| 6.1.1 供试昆虫 | 第124页 |
| 6.1.2 主要试剂和仪器设备 | 第124-125页 |
| 6.1.3 dsRNA的制备 | 第125页 |
| 6.1.4 siRNA的设计与合成 | 第125页 |
| 6.1.5 siRNA的与dsRNA的注射 | 第125-126页 |
| 6.1.6 赤拟谷盗RNAi沉默效应观察 | 第126-127页 |
| 6.2 结果与分析 | 第127-129页 |
| 6.2.1 外源dsRNA影响赤拟谷盗免疫相关基因表达 | 第127页 |
| 6.2.2 不同长度和浓度dsRNA对赤拟谷盗免疫相关基因的表达影响 | 第127-128页 |
| 6.2.3 沉默Defensin1和Defensin2对赤拟谷盗的影响 | 第128-129页 |
| 6.3 讨论 | 第129-131页 |
| 全文总结 | 第131-133页 |
| 参考文献 | 第133-153页 |
| 附录:TcChi1通路上基因的表达情况 | 第153-157页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第157-159页 |
| 致谢 | 第159-160页 |
