论文目录 | |
| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| 1.1 我国天然橡胶研究现状 | 第10页 |
| 1.2 乙烯刺激胶乳增产的研究进展 | 第10-11页 |
| 1.3 转录组测序(RNA-seq)的研究进展 | 第11-13页 |
| 1.4 qRT-PCR (qPCR)技术的应用 | 第13页 |
| 1.5 天然橡胶的生物合成机制的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.6 天然橡胶HMGR1基因研究现状 | 第15-16页 |
| 1.7 植物启动子的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.7.1 真核生物的启动子的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.7.2 启动子的分类 | 第17页 |
| 1.7.3 目前启动子克隆的主要方法 | 第17-18页 |
| 1.7.4 启动子功能的分析方法 | 第18-19页 |
| 1.7.5 启动子研究的目的意义 | 第19页 |
| 1.8 研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 1.9 本研究的技术路线 | 第20-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 生物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 载体及菌株 | 第21页 |
| 2.1.3 试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.5 培养基 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-48页 |
| 2.2.1 乙烯利处理橡胶树皮后进行转录组测序和生物信息分析 | 第23-31页 |
| 2.2.2 橡胶树HMGR1基因启动子的克隆 | 第31-35页 |
| 2.2.3 HMGR1基因启动子序列分析 | 第35页 |
| 2.2.4 HMGR1基因调控序列的序列缺失及5'端缺失表达载体的构建 | 第35-37页 |
| 2.2.5 植物表达载体P1301s-H1-1460-GUS的构建 | 第37-38页 |
| 2.2.6 农杆菌LBA4404介导的拟南芥转化实验 | 第38-42页 |
| 2.2.7 转基因拟南芥的GUS定性及定量分析 | 第42-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-69页 |
| 3.1 乙烯处理橡胶树皮转录组De nove组装结果分析 | 第48-54页 |
| 3.1.1 转录组测序和从头组装结果 | 第48-49页 |
| 3.1.2 功能注释和分类 | 第49-54页 |
| 3.2 HMGR1启动子及其5'端缺失序列的克隆 | 第54-57页 |
| 3.2.1 HMGR1启动子双酶切位点的选择 | 第54-56页 |
| 3.2.2 橡胶树叶片DNA的提取 | 第56页 |
| 3.2.3 启动子克隆的PCR产物的检测 | 第56-57页 |
| 3.2.4 TA克隆菌落PCR的验证 | 第57页 |
| 3.3 HMGR1基因启动子序列的生物信息学分析及缺失表达载体的构建 | 第57-60页 |
| 3.3.1 HMGR1基因启动子序列的生物信息学分析 | 第57-59页 |
| 3.3.2 缺失表达载体的构建 | 第59-60页 |
| 3.3 橡胶树HMGR1基因5'端调控序列PCR产物的检测及TA克隆菌落PCR的验证 | 第60-62页 |
| 3.4 HMGR1基因启动子的植物表达载体的构建及其缺失表达载体的构建 | 第62-63页 |
| 3.5 瞬时表达检测 | 第63-64页 |
| 3.6 转基因拟南芥的鉴定 | 第64-66页 |
| 3.6.1 筛选转基因拟南芥 | 第64-65页 |
| 3.6.2 PCR鉴定转基因 | 第65-66页 |
| 3.7 转基因拟南芥的表达分析 | 第66-69页 |
| 3.7.1 不同处理条件下转基因P1301-H1-1460拟南芥中GUS的qPCR表达分析 | 第66-69页 |
| 4 讨论 | 第69-74页 |
| 4.1 乙烯刺激胶乳增产机理 | 第69-71页 |
| 4.2 橡胶树HMGR1基因启动子的克隆和生物信息学分析 | 第71-72页 |
| 4.3 HMGR1启动子分析 | 第72-74页 |
| 5 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-86页 |
| 缩略语表 | 第86-87页 |
| 附录1: 主要试剂的配制 | 第87-91页 |
| 附录2: 硕士期间发表的论文 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
