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白腐菌漆酶基因的克隆及序列分析
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白腐菌漆酶基因的克隆及序列分析
论文目录
 
中文摘要第1-5 页
英文摘要第5-10 页
1 前言第10-25 页
　　· 漆酶的研究概况第10-17 页
　　　　· 漆酶的理化性质第10-12 页
　　　　· 漆酶分子生物学研究进展第12-17 页
　　　　· 漆酶的应用第17 页
　　　　· 国内外漆酶及其技术的研究进展第17 页
　　· 简并引物PCR技术及其在基因克隆中的应用第17-19 页
　　　　· 简并引物PCR技术第17-18 页
　　　　· 应用简并引物PCR获得全长基因的方法第18 页
　　　　· 简并引物PCR技术的应用范围第18 页
　　　　· 简并引物PCR在基因克隆中的应用第18-19 页
　　· cDNA末端快速扩增技术(RACE)研究进展第19-21 页
　　　　· RACE技术原理第19 页
　　　　· RACE技术的局限性第19 页
　　　　· RACE技术的改进与优化第19-21 页
　　　　· RACE在基因克隆上的技术优势及其前景第21 页
　　· 生物信息学的应用第21-24 页
　　　　· 数据库查询和数据库搜索第21-23 页
　　　　· 生物信息学的主要应用领域第23-24 页
　　· 白腐菌漆酶基因克隆方法的确定第24 页
　　· 研究的目的和意义第24-25 页
2 扁芝菌(Elfvngia applanata)mRNA无Poly(A)尾的验证第25-33 页
　　· 材料与方法第25-29 页
　　　　· 供试菌种第25 页
　　　　· 培养基及培养条件第25 页
　　　　· 菌丝收集第25-26 页
　　　　· 酶及生化试剂第26 页
　　　　· 扁芝菌总RNA的制备第26-27 页
　　　　· mRNA的分离纯化第27 页
　　　　· RT-PCR体系的建立第27-28 页
　　　　· 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测第28-29 页
　　　　· 阳性材料对照实验第29 页
　　· 结果与分析第29-31 页
　　　　· 扁芝菌总RNA分离结果第29-30 页
　　　　· mRNA的分离纯化结果第30 页
　　　　· 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析第30-31 页
　　· 结论与讨论第31-33 页
3 各菌种漆酶基因片段的克隆与序列分析第33-48 页
　　· 材料与方法第33-38 页
　　　　· 菌种、菌株、质粒与试剂第33 页
　　　　· 菌种培养及菌丝体收集第33 页
　　　　· 漆酶活性的检测第33-34 页
　　　　· 丝状真菌DNA的提取第34 页
　　　　· 简并引物的设计第34-35 页
　　　　· PCR体系的建立第35 页
　　　　· PCR反应条件的优化第35 页
　　　　· 扩增片段的克隆第35-38 页
　　　　· 序列测定和同源性比较第38 页
　　· 结果与分析第38-45 页
　　　　· 丁香醛连氮法测定Laccase活性第38 页
　　　　· 各菌种基因组DNA的提取第38-39 页
　　　　· PCR反应条件的优化第39 页
　　　　· 各菌种漆酶基因片段的扩增第39-40 页
　　　　· 阳性克隆的初步筛选第40 页
　　　　· 重组质粒的PCR鉴定第40-41 页
　　　　· 各菌种阳性重组体的测序结果第41-44 页
　　　　· 各菌种测序结果的同源性检索分析第44-45 页
　　　　· 漆酶基因片段结构分析和组织分析及氨基酸序列的推导第45 页
　　　　· 各菌种漆酶基因片段核苷酸序列和推导的氨基酸序列同源性分析第45 页
　　　　· 序列提交第45 页
　　· 结论与讨论第45-48 页
　　　　· 漆酶活性测定第45-46 页
　　　　· 丝状真菌DNA的提取第46 页
　　　　· 简并引物与梯度PCR的协同使用第46-47 页
　　　　· 漆酶基因片段克隆和序列分析第47-48 页
4 血红密孔菌漆酶全长基因的克隆第48-67 页
　　· 实验材料与试剂第48 页
　　· 实验方法第48-51 页
　　　　· 血红密孔菌RNA的提取第48 页
　　　　· RACE获得基因第48-50 页
　　　　· 血红密孔菌漆酶全长cDNA的扩增第50-51 页
　　　　· 血红密孔菌漆酶基因的DNA序列扩增第51 页
　　　　· 扩增产物的克隆和序列测定第51 页
　　　　· 序列分析第51 页
　　· 结果与分析第51-65 页
　　　　· 血红密孔菌漆酶全长cDNA的克隆和结构分析第51-61 页
　　　　· 血红密孔菌漆酶内含子的克隆和序列分析第61-65 页
　　· 结论与讨论第65-67 页
　　　　· SMART RACE在血红密孔菌漆酶基因克隆上的应用第65 页
　　　　· 血红密孔菌漆酶基因结构分析第65-67 页
5 结论第67-68 页
参考文献第68-75 页
附录第75-86 页
致谢第86页

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