论文目录 | |
| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 英文缩略词表 | 第12-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-22页 |
| 1.1 常用的表达系统 | 第13-15页 |
| 1.1.1 大肠杆菌表达系统 | 第13页 |
| 1.1.2 毕赤酵母表达系统 | 第13-15页 |
| 1.2 EGFP报告基因 | 第15-16页 |
| 1.2.1 EGFP的特点 | 第15-16页 |
| 1.2.2 EGFP的应用 | 第16页 |
| 1.3 真核生物的表达调控 | 第16-18页 |
| 1.3.1 真核生物的调控 | 第16-17页 |
| 1.3.2 真核生物的调控元件 | 第17-18页 |
| 1.4 ATG周围序列对蛋白表达的影响 | 第18-22页 |
| 第2章 EGFP表达载体的构建 | 第22-29页 |
| 2.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 器材及设备 | 第22-23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 引物 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 PCR扩增EGFP序列 | 第23-24页 |
| 2.2.2 pPICZαA-EGFP表达载体的构建 | 第24-27页 |
| 2.2.3 DNA序列的测定 | 第27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-29页 |
| 2.3.1 双酶切鉴定重组质粒pPICZαA-EGFP | 第27-28页 |
| 2.3.2 重组质粒pPICZαA-EGFP DNA序列的测定 | 第28-29页 |
| 第3章 EGFP序列突变及其在毕赤酵母中的表达 | 第29-55页 |
| 3.1 材料 | 第29-32页 |
| 3.1.1 引物 | 第29-30页 |
| 3.1.2 主要溶液配制 | 第30-32页 |
| 3.2 方法 | 第32-38页 |
| 3.2.1 在重组质粒pPICZ αA-EGFP-1 中插入突变序列 | 第32页 |
| 3.2.2 大肠杆菌DH 5α的转化 | 第32-33页 |
| 3.2.3 毕赤酵母电转化 | 第33-35页 |
| 3.2.4 诱导克隆表达 | 第35页 |
| 3.2.5 鉴定阳性转化子 | 第35-36页 |
| 3.2.6 EGFP荧光检测及荧光值的测定 | 第36页 |
| 3.2.7 提取酵母RNA及反转录 | 第36-38页 |
| 3.3 实验结果 | 第38-52页 |
| 3.3.1 PCR法突变获得PstⅠ酶切位点 | 第38页 |
| 3.3.2 胶回收重组质粒pPICZαA-EGFP-n电泳图 | 第38-39页 |
| 3.3.3 部分酵母基因组DNA电泳图谱 | 第39页 |
| 3.3.4 PCR法筛选EGFP阳性菌株 | 第39-40页 |
| 3.3.5 最佳诱导时间的选择 | 第40-42页 |
| 3.3.6 未修饰的EGFP的荧光图 | 第42-43页 |
| 3.3.7 EGFP的表达量及其对mRNA水平的影响 | 第43-50页 |
| 3.3.8 部分阳性克隆测序结果 | 第50页 |
| 3.3.9 部分酵母RNA电泳图谱 | 第50-52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-55页 |
| 第4章 结论 | 第55-56页 |
| 4.1 本实验的结果 | 第55页 |
| 4.2 实验的创新之处 | 第55页 |
| 4.3 拟进一步的研究方案 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录 | 第62-68页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
